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- Solarbio
- 北京
- BC5725
- 2025年07月15日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
2-8°C
- 保质期：
6个月
- 英文名：
Soil Acidic xylanase (S-ACX）Activity Assay Kit
- 库存：
999
- 供应商：
北京索莱宝科技有限公司
- CAS号：
BC5725-100T/48S
- 规格：
100T/48S
土壤酸性木聚糖酶（S-ACX）活性检测试剂盒说明书
微量法
货号：BC5725
规格：100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
| 试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
| 缓冲液 |
液体35 mL×1瓶 |
2-8℃保存 |
| 试剂一 |
液体18 mL×1瓶 |
2-8℃保存 |
| 试剂二 |
液体15 mL×1瓶 |
2-8℃保存 |
| 标准品 |
粉剂×1支 |
2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 标准品稀释液的配制：临用前按缓冲液：试剂一= 4mL：2mL（6mL，约一条标曲稀释用量）的比例进行配制，现配现用。
2、 标准品：10mg木糖。临用前加入667μL标准品稀释液配制成100μmol/mL的木糖标准液，2-8℃保存8周。
产品说明：
土壤酸性木聚糖酶（Soil acid xylanase, S-ACX），又称为土壤酸性半纤维素酶，主要分离自最适生长pH为4-5的微生物在酸性环境中，S-ACX催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖，在沸水浴条件下进一步与3,5-二硝基水杨酸发生显色反应，在540nm处有特征吸收峰，反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比，通过测定反应液在540nm吸光值增加速率，可计算S-ACX活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、低温离心机、水浴锅、研钵、30~50目筛、蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30~50目筛。
二、测定步骤
1、 可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至540nm，分光光度计用蒸馏水调零。
2、 标准品的稀释：临用前将标准品用标准品稀释液稀释为2、1.5、1.2、1、0.8、0.4、0.2μmol/mL的标准品待测。
3、 标准品稀释表：
| 序号 |
稀释前浓度（μmol/mL） |
标准品体积（μL） |
稀释液体积（μL） |
稀释后浓度（μmol/mL） |
| 1 |
100 |
100 |
900 |
10 |
| 2 |
10 |
200 |
800 |
2 |
| 3 |
10 |
150 |
850 |
1.5 |
| 4 |
10 |
120 |
880 |
1.2 |
| 5 |
10 |
100 |
900 |
1 |
| 6 |
1 |
200 |
50 |
0.8 |
| 7 |
1 |
100 |
150 |
0.4 |
| 8 |
1 |
50 |
200 |
0.2 |
备注：实验中每管需要150μL。
4、 样本测定（在EP管中加入下列试剂）
| 试剂名称（μL） |
对照管 |
测定管 |
空白管 |
标准管 |
| 样本 |
0.05g |
0.05g |
- |
- |
| 缓冲液 |
200 |
200 |
- |
- |
| 试剂一 |
- |
100 |
- |
- |
| 涡旋混匀，置于50℃水浴锅中反应2h，立即沸水浴中10min灭活。（注意不要让盖子爆开，以免进水，改变了反应体系），冷却至室温。 |
- |
- |
||
| 试剂一 |
100 |
- |
- |
- |
| 常温，12000g离心10min，取上清 |
- |
- |
||
| 上清液 |
150 |
150 |
- |
- |
| 标准品 |
- |
- |
- |
150 |
| 标准品稀释液 |
- |
- |
150 |
- |
| 试剂二 |
100 |
100 |
100 |
100 |
| 涡旋混匀，沸水浴中准确显色5min(注意不要让盖子爆开，以免进水改变了反应体系)，冷却至室温后，室温12000g离心5min，吸取上清液200μL于96孔板或微量玻璃比色皿中，测定各管540nm下的吸光度，分别记为A对照、A测定、A空白、A标准。计算ΔA测定=A测定-A对照，ΔA标准=A标准-A空白。空白管和标准曲线只需测1-2次。每个测定管需设一个对照管。 |
||||
三、S-ACX计算公式
1. 标准曲线的绘制：
根据标准管的浓度（x，μmol/mL）和吸光度ΔA标准（y，ΔA标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA测定（y，ΔA测定）带入公式计算样本浓度（x，μmol/mL）。
2. 土壤S-ACX活性计算：
酶活定义：50℃，pH 4.8条件下，每克土壤每小时分解木聚糖产生1μmol还原糖所需的酶量为一个酸性木聚糖酶的活性单位。
S-ACX活性（U/g 土样）=x× V反总÷W÷T×F=0.15×x÷W×F
V反总：反应体系总体积，0.3mL；W：样本质量，g；T：反应时间，2h；F：稀释倍数。
注意事项：
1. 若样本ΔA<0.01，可适当增大样本量或者50℃反应时间后测定；若样本ΔA>1.5或者A测定＞1.5时，可用蒸馏水稀释上清液后测定，注意同步修改计算公式中的稀释倍数。
2. 建议使用螺旋管，防止沸水浴过程中盖子爆开，改变反应体系。
实验实例：
1、 取0.05g野蘑菇土样，按操作表进行第一步反应2h后，取上清液用蒸馏水稀释2倍后按照测定步骤操作，用96孔板测得ΔA测定=A测定- A对照=0.431-0.099=0.332，带入标曲y=0.6582x-0.153 （R2=0.999），计算x=0.737，按样本质量计算S-ACX活性得：
S-ACX活性（U/g 土样）=0.15×x÷W×F =4.422 U/g 土样。
相关系列产品：
BC5730/BC5735 土壤中性木聚糖酶（S-NEX）活性检测试剂盒
BC5740/BC5745 土壤碱性木聚糖酶（S-BAX）活性检测试剂盒
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