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- Solarbio
- 北京
- BC5085
- 2026年08月13日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20°C
- 保质期：
6个月
- 英文名：
β-Hydroxybutyric acid (β-HB) Content Assay Kit
- 库存：
999
- 供应商：
北京索莱宝科技有限公司
- CAS号：
BC5085-100T/48S
- 规格：
100T/48S
β-羟丁酸（β-HB）含量检测试剂盒（WST法）说明书
微量法
货号：BC5085
规格：100T/48S
产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
| 试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
| 试剂一 |
液体25mL×1瓶 |
2-8℃保存 |
| 试剂二 |
粉剂×2支 |
-20℃保存 |
| 试剂三 |
粉剂×2支 |
-20℃保存 |
| 显色液 |
液体1.5mL×1支 |
-20℃保存 |
| 标准品 |
粉剂×1支 |
2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 试剂二：临用前取一支加入600μL蒸馏水，充分溶解。用不完的试剂分装后-20℃可保存3周。避免反复冻融。
2、 试剂三：临用前取一支加入400μL蒸馏水，充分溶解。用不完的试剂分装后-20℃保存，可以保存2周。避免反复冻融。（试剂三由于不便保存，故多给一支）
3、 标准品：8mg 3-羟基丁酸钠。临用前加入980μL蒸馏水，充分溶解，即8mg/mL 3-羟基丁酸钠标准溶液。4℃保存1个月。
4、 工作液配制：临用前根据试验所需量将试剂一、试剂二、试剂三按照170:8:2（共180μL，1T的量）的比例配成工作液，充分混匀，置于37℃保温15min（此步骤不可省略），现用现配，工作液在4h内用完。
产品说明：
β-羟丁酸（β-HB），在严重酸中毒患者体内，由于酸中毒使患者体内NADH生成增加，进而促使β-羟丁酸与乙酰乙酸的比值自正常的2:1提高至16:1。β-羟丁酸在检测糖尿病酮症酸中毒诊断、治疗中有重要意义，对糖尿病的早期诊断也有重要意义。本试剂盒适用于血清、血浆、尿液等样本
在pH8.8和37℃条件下，β-HB在β-羟丁酸脱氢酶（HBDH）催化下发生反应，同时NAD+被还原成NADH；在1-mPMS作用下，WST-1可与NADH反应，产生水溶性formazan，在450nm下有特征吸收峰。通过检测450nm下波长变化，可计算出β-HB的含量。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、冰和蒸馏水。
操作步骤：
适用样本
血清、血浆、尿液等样本，直接检测即可，若溶液有浑浊可离心后进行测定
二、测定步骤
1、 分光光度计/酶标仪预热30 min以上，调节波长至450 nm，蒸馏水调零。
2、 标准溶液配制：将8mg/mL 3-羟基丁酸钠标准溶液，用蒸馏水稀释至0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0.0078125mg/mL标准溶液待用。
3、 按下表步骤加样：
| 试剂名称（μL） |
测定管 |
对照管 |
空白管 |
标准管 |
| 样本 |
20 |
20 |
|
|
| 蒸馏水 |
|
|
20 |
|
| 标准溶液 |
|
|
|
20 |
| 工作液 |
180 |
|
180 |
180 |
| 试剂一 |
|
180 |
|
|
| 37℃条件下反应10 min |
||||
| 显色液 |
10 |
10 |
10 |
10 |
| 37℃条件下避光反应20 min后，取200μL至96孔板或微量玻璃比色皿中，于450 nm处测定吸光度。分别记为A测定、A对照、A空白、A标准。ΔA测定=A测定-A对照，ΔA标准=A标准-A空白。空白管只需做1-2次；标准曲线只需做1-2次。 |
||||
三、β-HB含量计算
1、 标准曲线绘制：以β-HB标准溶液浓度为横坐标（x，mg/mL），以ΔA标准为纵坐标（y）绘制标准曲线，得到线性回归方程y=kx+b，将ΔA测定带入方程求得x（mg/mL）。
2、 计算公式
（1）按照蛋白浓度计算
β-HB含量（μmol /mg prot）=x×V样÷（V样×Cpr）÷126.09×1000=7.931x÷Cpr
（2）按照血清（浆）体积计算
β-HB含量（μmol /mL）=x×V样÷V样÷126.09×1000=7.931x
V样：反应中加入样本体积，20 μL=0.02 mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；126.09：β-羟基丁酸钠的分子量，mg/mmol；1000：1mmol=1000μmol。
注意事项：
1、显色完成后，请在10 min之内完成检测。
2、如果ΔA测定低于或超过标准曲线吸光值范围，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
实验实例：
1. 取20μL 牛血清按上述步骤进行实验，用96孔板测定后进行计算ΔA测定=A测定-A对照=0.455-0.082=0.373，带入标准曲线y=0.4913x+0.0043，得x=0.750。计算
β-HB含量（μmol /mL）=7.931x=5.948 μmol /mL
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差异，例如在糖尿病酮症酸中毒早期病命名中，主要酮体成分β羟丁酸，很少或缺乏乙酰乙酸，此时测得结果可导致对总酮体量估计不足。在糖尿病酮症酸中毒症状缓解之后，β-羟丁酸转变为乙酰乙酸，反而使乙酰乙酸含量比初始急性期增高，易对病情估计过重。因此检验人员必须注意病程发展，与临床医生共同分析实验结果。
