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- 2026年04月20日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 规格：
20T
产品简介：
单克隆抗体序列可变区获取和序列测定是基因工程抗体的必备技能，但是由于抗体基因序列5’-端复杂性和多样性，往往获取可变区序列比较困难，5’-RACE虽然可以实现，但是成本高，操作复杂，由于抗体序列的复杂性和SP20基因组干扰序列太多，RACE往往不是较优的手段；本试剂盒通过优化设计采用高效引物Mix组合覆盖，可以快速简便扩增出抗体基因可变区序列，扩增序列之后连到T载体，通过简单测序，可以快速得到抗体可变区序列，后期用于基因工程抗体的改造表达。
本试剂盒的优势：
1. 操作时间短，如果操作顺利，3-5工作日内可以获取到抗体可变区序列；
2. 本试剂盒操作简单，具备基本分子生物学操作基础的人可以轻松入手实现操作；
3. 本试剂盒可以剔除和降低基因组或者相似序列对序列准确度的影响；
4. 实验室内实现抗体基因测序，成本更低：目前委托技术服务公司进行杂交瘤测序费用较高；
5. 实验室内实现抗体基因测序，更有利于抗体序列的核心知识产权和专利的保护。
特别注意事项：
1. 本试剂盒的操作人员必须熟练掌握分子生物学相关实验操作技能，包括mRNA提取，反转录，PCR扩增， PCR产物胶回收，T载体连接，大肠杆菌转化，菌落PCR鉴定 ，以及测序结果的识读和序列比对等技能；
2. 实验室必须具备开展以上实验所必须的实验仪器和实验条件；
3. 实验室必须具备开展以上实验所必须的高性能试剂；
4. 务必保证杂交瘤细胞株为单克隆，状态好，传代培养越少越好。
试剂盒组分
|
组分名称 |
内容 |
备注说明 |
|
5XRT-Mix |
50ul |
1 |
|
2XPCR mix(Vk) |
300ul |
1 |
|
2X PCR mix(VH) |
300ul |
1 |
|
Primer SP20 |
100ul |
1 |
|
ddH2O |
1ml |
1 |
|
产品说明书 |
一份 |
试剂盒保存/保质期：
-20℃/12个月。
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文献和实验飞的 GeneArt™ Gibson Assembly® 克隆试剂盒系列为例，Gibson Assembly 实际上是生命科学狂人文特尔（就是那个敢单挑 6 国合力的国际人类基因组计划还占尽上风，逼得当时美国总统出面协调让双方合作并同时发表结果的）东山再起后成立的 Venter 研究所旗下 Gibson 博士开发的，里面包含了精心优化搭配的三种酶活性：外切酶会外切双链末端而产生单链 3’突出端，使得外源片段和线性化载体的互补末端能够退火，聚合酶活性会填补退火片段产生的缺口，连接酶活性能够在重组后进行连接。得到
转基因生物的等位基因分型。（A）可用针对目标区域的特异性PCR引物来检测基因位点是野生型序列（深灰色）还是转基因序列（黄色）。（B）如该凝胶照片所示，PCR 产物可用于确定基因型。在这些实验中，使用了野生型 (+/+)和转基因 (+/–和–/–) 小鼠的基因组 DNA。 但是如果为了检测特定核苷酸突变，则必须对扩增的序列进行进一步分析。例如， PCR 扩增子测序就是研究单核苷酸变异（SNVs）和单核苷酸多态性（SNP）的方法之一。强烈推荐使用高保真 DNA 聚合酶，以防止在 PCR 过程中引入多余
9.0 +44 表1说明 列出的基因使用GeneRacer™步骤扩增。PCR产物使用S.N.A.P.凝胶回收柱回收并克隆至pCR®4-TOPO®载体（Invitrogen）。对每一个基因都随机挑选了12个克隆并测序。序列同GenBank数据库中的序列相比较，确定5’末端超出的序列。使用每个基因所获得的最长序列比较统计超出GenBank序列第一个碱基的多余碱基的数目。 获得全长的cDNA序列 GeneRacer™试剂盒确保您成功获得mRNA转录本的全长
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