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赛默飞世尔细胞培养与常见问题解决&移液器维修交流会在重庆成功举办

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荧光定量 PCR 异常扩增曲线分析攻略

扩增曲线的分析攻略。 1、确认软件设置是否正确 对照试剂盒说明书，检查时间、温度、循环数、荧光采集等是否设置正确。有一个比较容易忽略的设置问题是，需要看下所选用的试剂中是否含有 ROX 来作为参比荧光染料。Applied Biosystems™ 系列荧光定量 PCR 仪器可以用 ROX 来作为参比荧光染料，用以校正仪器系统以外的物理误差，比如均一化校正由于移液误差或者蒸发导致的批内体积误差等。目前市面上有的的荧光定量 PCR 预混液是不含有 ROX 的，当用此类试剂的时候，应该将 ROX 参比

四步致胜奇招 高效克隆你值得拥有（下篇）

Step 2 · 根据线性化载体两端的序列，设计目标片段的引物——划重点！这对引物外侧要有 15-40 碱基与载体两端分别同源，内侧要有 15-20 个碱基与目标片段同源。如果想要设计启动子 SD 序列跟 ATG 的距离，这就是好机会。合成引物不要超过 65 个碱基为好。 · Step 3 · 以这对引物PCR目标基因，就能得到两端与载体同源的目标片段。按比例混合片段和线性化载体，加入关键试剂——预混酶并在 50 度保温 15-60 分钟（因插入片段数量而略有不同，以操作手册为准）——以赛默飞