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- 2025年07月15日
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文献和实验【交流】DIG/Biotin标记的Southern/Northern杂交专题讨论
性分析（RFLP）等。 Southern印迹杂交技术包括两个主要过程：一是将待测定核酸分子通过一定的方法转移并结合到一定的固相支持物（硝酸纤维素膜或尼龙膜）上，即印迹（blotting）；二是固定于膜上的核酸同位素标记的探针在一定的温度和离子强度下退火，即分子杂交过程。该技术是1975年英国爱丁堡大学的E.M.Southern首创的，Southern印迹杂交故因此而得名。 Southern印迹杂交技术是分子生物学领域中最常用的具体方法之一。其基本原理是：具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件
含还原剂（如Na2 S2 O5 等）量多时，会抵消氯胺T的作用，降低碘利用率，甚至导致标记完全失败。放射性碘源要用无载体的，标记所用全部用具和试剂必须不含碘；只要有极少量的碘的污染，非放射性碘就会稀释放射性碘，使放射性碘利用率显著降低。为了便于放射性防护和除污染，以及减少射线对蛋白质分子的损伤，标记投入的放射碘量不宜过大，一般以 （2）放射性碘与多肽、蛋白质用量的比例：这比例对标记结果的影响很大。如上述原因，一般标记时放射性投入量不宜过多，示踪实验室中常规每次只用1～2mCi
蛋白质、多肽的放射性核素（125I）的标记氯胺T法（ch-T法）
，新鲜配制，即配即用。 （3）偏重亚硫酸钠溶液：用0.05mol/L pH7.4 PB配制成2mg/ml，新鲜配制。 （4）KI溶液：用0.05mol/L pH7.4 PB配制成2mg/ml。 （5）待标记的蛋白质或多肽：用0.05mol/L pH7.4 PB配制成1mg/ml。 （6）Na125 I溶液（3.7GBq/ml） （7）分离柱和Sephadex G50凝胶 （8）0.05mol/LpH7.4 磷酸盐缓冲液(PBS) （9）放射性薄层扫描仪和活度
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