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文献和实验含还原剂(如Na2 S2 O5 等)量多时,会抵消氯胺T的作用,降低碘利用率,甚至导致标记完全失败。放射性碘源要用无载体的,标记所用全部用具和试剂必须不含碘;只要有极少量的碘的污染,非放射性碘就会稀释放射性碘,使放射性碘利用率显著降低。为了便于放射性防护和除污染,以及减少射线对蛋白质分子的损伤,标记投入的放射碘量不宜过大,一般以 (2)放射性碘与多肽、蛋白质用量的比例:这比例对标记结果的影响很大。如上述原因,一般标记时放射性投入量不宜过多,示踪实验室中常规每次只用1~2mCi
蛋白质、多肽的放射性核素(125I)的标记氯胺T法(ch-T法)
,新鲜配制,即配即用。 (3)偏重亚硫酸钠溶液:用0.05mol/L pH7.4 PB配制成2mg/ml,新鲜配制。 (4)KI溶液:用0.05mol/L pH7.4 PB配制成2mg/ml。 (5)待标记的蛋白质或多肽:用0.05mol/L pH7.4 PB配制成1mg/ml。 (6)Na125 I溶液(3.7GBq/ml) (7)分离柱和Sephadex G50凝胶 (8)0.05mol/LpH7.4 磷酸盐缓冲液(PBS) (9)放射性薄层扫描仪和活度
光染料的强度:PE > APC > FITC > PerCP。 3. 多色流式细胞检测中荧光染料荧光图案的选择原则 1) 根据机器配置选择最亮的荧光染料 了解你使用的流式细胞仪的性能,大多数流式细胞仪有两个或者多个激光器,有五种波长可供选择:紫外(355 nm)、紫色(405 nm)、蓝色(488 nm)、黄色(561 nm)和红色(640 nm)。除了激光器,具体的虑光片和检测器也决定了你的配置可同时检测多少种颜色。 多色标记荧光染料尽量选用不同激光激发的染料。荧
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