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单克隆抗体制备

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      单克隆抗体制备

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      北京百欧泰

    单克隆抗体制备 服务编号:BIOSV042 单克隆抗体指由单一的浆细胞克隆所产生的高度均一、仅针对某一抗原表位的抗体。当机体受到抗原刺激后,B淋巴细胞被抗原决定簇激活,增殖分化出大量的浆细胞,而后由浆细胞分泌出特异性抗体。本公司提供的单克隆抗体制备服务包括鼠单克隆抗体制备和兔单克隆抗体制备。本服务项目需要根据客户的要求选择免疫动物,并进行实验。 (一)鼠单克隆抗体制备 本服务项目是按照客户要求免疫6-8周龄雌性Balb/c 小鼠,提取B细胞与SP2/0 骨髓瘤细胞融合,制备特异性的鼠单克隆抗体。 定制类型: (1)常规科研抗体定制:应用于 WB/IHC/IF/IP 的抗体制备服务;保证型抗体制备服务;ELISA 配对抗体制备服务;中和功能抗体制备服务。 (2)IVD 抗体定制:病理诊断类抗体定制;免疫诊断类抗体对定制;点突变类抗体定制。 (二)兔单克隆抗体制备 与鼠单克隆抗体相比,兔单克隆抗体具有亲和力高、识别的抗原表位更加丰富,能够识别在小鼠体内没有免疫原性抗原的突出优点。本服务项目是按照客户要求免疫家兔,提取B细胞,构建噬菌体展示兔免疫单链抗体库,筛选高亲和力的兔单链抗体。 实验流程:抗原设计-免疫兔子-取B淋巴细胞或骨髓脾细胞-制备cDNA-构建抗体库-构建真核表达载体抗体-抗体纯化与检测 (三)小分子单克隆抗体制备 客户只需提供抗原详细信息、抗原的小分子标准品、小分子偶联要求,我们可以为客户合成抗原并制备符合要求的单克隆抗体。我们可以为客户提供基于两种方法的单克隆抗体定制服务:基于杂交瘤细胞的抗体定制服务;基于天然噬菌体抗体文库的筛选技术。 抗体应用:小分子化合物的快速检测、代谢中间体检测、食品残留检测、毒品检测等。 (四)人源化单克隆抗体开发服务 由于临床上使用的单抗多数为鼠源性单抗,容易产生HAMA反应,这使得鼠源单抗在临床治疗中的应用受到限制。抗体人源化也因此成为解决临床HAMA反应的一种有效方案。百欧泰生物利用生物信息学、细胞展示技术和噬菌体展示技术对多种动物源抗体进行人源化改造,并提供全人源化的单克隆抗体开发服务。 服务内容:公司可提供9~18条人源化序列选择、CDB移植,并提供专业的质量评价体系、人源化抗体与嵌合抗体体外生物活性分析、FACS和SPR亲和力检测以及同源物种交叉反应分析等。 (五)稳定细胞系构建服务 稳转细胞系是指在细胞中持续稳定表达特定基因或沉默特定基因表达。构建稳转细胞系的基本原理是用转染质粒或病毒感染的方法将构建好的含外源DNA的载体导入细胞,根据不同的基因载体中所含的抗性标志选用相应的药物进行选择性筛选,得到可稳定表达目的蛋白,或者稳定沉默特定基因表达的细胞系。 服务内容:基因过表达稳定细胞系的构建;RNA干扰基因敲低稳定细胞系的构建;CRISPR稳转细胞系基因敲除株。 (六)甲基化单克隆抗体制备服务 甲基化是从活性甲基化合物上催化其甲基转移到其他化合物的过程,也是一种重要的蛋白质和核酸修饰。由于甲基化修饰对于细胞信号转导、基因功能以及遗传改变发挥着重要的作用,因此甲基化特异性抗体的制备尤为重要。百欧泰生物可提供甲基化修饰性单克隆抗体定制服务,抗体制备经验丰富,抗体发现平台完善。通过体外合成甲基化多肽抗原制备高特异性的甲基化抗体,该抗体具有高度的特异性和灵敏度,仅识别甲基化抗原。 服务内容:甲基化多肽的设计合成、多肽与载体蛋白偶联、动物免疫、检测细胞融合、筛选单克隆细胞株、效价检测。 (七)磷酸化单克隆抗体制备服务 蛋白质转录后修饰,特别是蛋白质的磷酸化,参与体内大部分的细胞活动,检测磷酸化蛋白对研究多种发育障碍及人类疾病至关重要。百欧泰生物提供的磷酸化单克隆抗体定制服务,成功率高,制备的亲和纯化磷酸化特异抗体,具有很高的灵敏度。 服务内容:磷酸化多肽的设计合成、多肽与载体蛋白偶联、免疫动物制备抗血清、抗体纯化、特异性亲和纯化、效价检测。 (八)重组兔单抗制备服务 重组兔单克隆抗体在一致性上类似于传统的小鼠单克隆抗体,同时提供了动物来源的自由选择。对兔子进行免疫,并且不使用杂交瘤,而是分离和筛选外周血单核细胞。将DNA克隆为文库并筛选后,将其亚克隆至单个克隆并再次筛选。所得DNA用于通过细胞培养生产无动物来源的制剂。百欧泰拥有成熟的单克隆抗体生产技术,同时,也提供抗原制备服务,包括DNA合成、质粒构建、蛋白表达、蛋白纯化、蛋白修饰、多肽合成、多肽修饰、多肽与载体蛋白交联、小分子结构分析及与载体蛋白交联等。如客户需要,我们还提供抗体提纯及抗体鉴定服务。 应用范围: 检测更小或者更精细的表位、蛋白质修饰和定量、蛋白质构象变化和蛋白质相互作用、表观遗传学。

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    • 单克隆抗体制备

      1975年Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞与和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合,形成的杂交瘤细胞既可产生抗体,又可无性繁殖,从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破使血清学的研究进入了一个高度精确的新纪元。 免疫细胞化学的 技术关键之一是制备特异性强、亲合力大、滴度高的特异性抗体,由于每种抗原都有几个抗原决定簇,用它免疫动物将产生对各个决定簇的抗体,即多克隆抗体。单克隆抗体则是由一个产生抗体的细胞与一个骨髓瘤细胞融合而形成的杂交廇细胞经无性繁殖而来

    • 单克隆抗体制备过程

      1. 杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化 在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞,只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞,因此,必须进行筛选和克隆化。通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。采用灵敏、快速、特异的免疫学方法,筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞,并进行克隆扩增。经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后,及时进行冻存。2. 单克隆抗体的大量制备 单克隆抗体的大量制备重要采用动物体内诱生法和体外培养法。

    • 单克隆抗体制备

      一、实验目的: 单克隆抗体制备是细胞免疫学的一个重要里程碑,它涵盖了细胞培养、细胞融合、免疫动物和抗体效价检测等各个方面内容。了解单克隆抗体制备的原理、主要步骤和方法。 二、实验原理: 骨髓瘤细胞在体外培养能大量无限增殖,但不能分泌特异性抗体;而抗原免疫的B淋巴细胞能产生特异性抗体,但在体外不能无限增殖。将免疫脾细胞与骨髓瘤细胞融合后形成的杂交瘤细胞,继承了两个亲代细胞的特性,既具有骨髓瘤细胞能无限制增殖的特性,又具有免疫B细胞合成和分泌特异性抗体的能力。经在HAT培养

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