人肾足细胞

一、基本信息

细胞名称	人肾足细胞	组织来源	肾脏组织
商品货号	YS-01X8088	种属来源	人
包被条件		换液频率	每2-3天换液一次
生长特性	贴壁培养	细胞形态	不规则，含足突细胞
传代特性	细胞特性确定传代	消化液	0.25%胰蛋白酶
培养基	原代上皮细胞培养体系	培养条件	气相：  空气，95%；CO2 ，5%

 

细胞简介

肾小球为血液过滤器，肾小球毛细血管壁构成过滤膜。肾小球过滤膜从内到外有 三层结构：  内层为内皮、中层为肾小球基膜、外层为上皮细胞层，  上皮细胞又称 足细胞，其不规则突起称足突，  其间有许多狭小间隙，血液经滤膜过滤后，  滤液 入肾小球囊。在正常情况下，血液中绝大部分蛋白质不能滤过而保留于血液中， 仅小分子物质如尿素、葡萄糖、电解质及某些小分子蛋白能滤过。  肾足细胞即肾 小球上皮细胞，  它附着于肾小球基底膜的外侧，连同肾小球基底膜和肾小球基膜 一起构成了肾小球血液滤过屏障。又由于正常成年机体的肾脏足细胞是一种终末 分化细胞，  体外培养的原代细胞不能增殖。足细胞呈星型多突状，  胞体较大，由 胞体伸出许多突起，  呈指状交叉覆盖于肾小球基底膜外表面，  并通过黏附分子和 蛋白多糖分子与肾小球基底膜相连。足细胞在正常情况下可以分泌肾小球基底膜 的主要组成成分IV型胶原和纤维连接蛋白,在促肾纤维化引资等刺激下还能分泌具 有降解肾小球基底膜作用的基质金属蛋白酶和组织蛋白酶，从而在肾小球基底膜 的代谢平衡中发挥重要作用。

方法简介：实验室分离的人肾足细胞采用组织贴块法并结合内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。
质量检测：实验室分离的人肾足细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
人肾足细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
二、细胞培养状态
发货时发送细胞电子版照片
三、使用方法
人肾足细胞是一种贴壁细胞，细胞形态呈不规则，含足突细胞 ，在技术部标准操作流程下，细胞可传2-3代；建议您收到细胞后尽快进行相关实验。客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。
1. 取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。

2. 贴壁细胞消化
1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，
37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml完全培养基终止消化；
3)用吸管轻轻吹打混匀，按传代比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度
的细胞培养箱中静置培养；
4)待细胞完全贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。          
3. 细胞收货脱落
1)收集所有细胞悬液，1000rpm，离心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至离心管中，重悬沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min)；消化完向离心管内
加入5ml完全培养基终止消化；
3)经1000rpm，离心5min，丢弃上清，用5ml完全培养基(补加1%FBS，促进贴壁)重悬沉淀，接种于新的培养瓶内；
4)待细胞完全贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基(37℃预热)。
4. 细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性，贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿（如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等）时，需要对实验
器皿进行包被，以增强细胞贴壁性，避免细胞因没贴好影响实验；包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚赖氨酸PLL
（0.1mg/ml），明胶（0.1%），依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。


原代细胞培养方法及注意事项：
1.准备：取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。
2.布局：点燃酒精灯，安装吸管帽。
3.处理组织：把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。
4.剪切：用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块，以便于消化。加入比组织块总量多30~50倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入三角烧瓶中，结扎瓶口或塞以胶塞。
5.消化：或用恒温水浴，或置于37℃温箱消化均可，消化中每隔20分钟应摇动一次，如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。
6.分离：在消化过程中见消化液发混浊时，可用吸管吸出少许消化液在镜下观察，如组织已分散成细胞团或单个细胞，立即终止消化，随即通过适宜不锈钢筛，滤掉尚未充分消化开的组织块。低速（500~1000转/分）离心消化液5分钟，吸出上清，加入适量含有血清的培养液。
7.计数：用计数板计数，如细胞悬液细胞密度过大，再补加培养液调整后，分装入培养瓶中。对大多数细胞来说，pH要求在7.2~7.4范围，培养液呈微红色，如颜色偏黄，说明液体变酸，可用NaHCO3调整。
8.培养：置于36.5℃温箱培养，如用CO2温箱培养，瓶盖需拧松半圈。
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