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文献和实验时枪头保持于液面以下,与孔壁保持一定角度,避免贴壁或触底——残留于非包被区的液体会导致实际加入量不足; ●样本与标准品加样建议使用多道移液器,可提高加样速度并改善孔间一致性; ●孵育时间应严格控制,建议每小时孵育时间误差控制在 ±5 min 以内。 2、洗板 洗涤是 ELISA 操作中影响背景与精密度的核心环节:洗涤不彻底导致本底升高,洗涤过度或孔内干燥则导致重复性变差。 (1)洗液配制。 浓缩洗涤缓冲液建议使用去离子水或蒸馏水稀释,避免水质杂质引入干扰。 (2)手工洗板。 倾斜酶标板倒空
有替代前者的趋势。由于ABS-ELISA较普通ELISA多用了两种试剂,增加了操作步骤,在临床检验中ABS-ELISA应用不多。科研项目中检测微量的成分如细胞因子常采用本法。晶美分装ELISA KIT采用的方法:1, TORCH及传染病试剂盒(间接法),见2.2.32, TORCH-IgM捕获法特色:包被抗体,标记抗原原理:3, 细胞因子试剂盒采用的方法路线(ABC-ELISA)原理产品特色:采用ABC法,灵敏度更高,特异性更强。生物素抗体和酶联物是浓缩的,使用前需用相应的缓冲液稀释。酶联物可以通用
液 ⑤ 用ELISA检测仪测定OD值。 3、双夹心ELISA 此法与双抗体夹心ELISA的主要区别在于:它是采用酶标抗抗体检查多种大分子抗原,它不仅不必标记每一种抗体,还可提高试验的敏感性。 此法的基本程序为: ① 加抗体(Ab-1)包被 → 4℃过夜,洗涤三次、抛干 ② 加待检抗原(Ag) → 37℃ 60分钟,洗涤三次、抛干 ③ 加用非同种动物生产的特异性抗体(Ab-2)→ 37℃ 60分钟,洗涤三次、抛干 ④ 加入酶标抗Ab-2抗体(AB-3)→ 37℃ 60
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