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RNA/DNA/GST pul
广州晶世特生物科技有限公司
GST pull Down作为体外检测蛋白间直接互作的行之有效的方法,可用于证实预测的蛋白质-蛋白质相互作用的存在,也可用作未知的蛋白质-蛋白质相互作用的初始筛选测定法。 RNA pull down 作为研究 RNA 与蛋白互作的核心技术,已成为研究焦点。RNA pull down 是使用体外转录法标记生物素 RNA 探针,然后与胞浆蛋白提取液孵育,形成 RNA-蛋白质复合物。该复合物可与链霉亲和素标记的磁珠结合,从而与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后,通过 WB 实验检测特定的 RNA 结合蛋白是否与 RNA 相互作用,或者结合 MS 筛选 RNA 结合的未知蛋白。 DNA pull down是一种获取DNA结合转录调控蛋白质实验技术。针对目标区域设计特异性DNA probe,并经过脱硫生物素标记;细胞核提取物与DNA probe孵育,作用特异性转录调控蛋白质可以和DNA probe结合;经链霉亲和素偶联magnetic beads亲和结合,及洗涤去除非特异性结合蛋白分子;最后,洗脱获得具备转录调控功能的蛋白质;以上蛋白质,可以开展western blot或质谱鉴定获得结合强度及蛋白质类型。
GST pull down实验基于GST(glutathione-S-transferase)即谷胱甘肽-S-转移酶蛋白可以与谷胱甘肽(Glutathione,GSH)结合。将GSH固定于琼脂糖珠上,形成GSH-琼脂糖珠,将已知蛋白X与GST融合表达,获得的GST-X可与GSH-琼脂糖珠结合,若环境中存在与X蛋白互作的蛋白Y,则会形成“琼脂糖珠-GSH-GST-X-Y”复合物,与X蛋白互作的蛋白即可被分离并检测。
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