2路分选架，15mL

FACSAria流式细胞仪无菌分选的基本流程

一、环境和液流的消毒 1、准备足量的无菌1×PBS（3L左右）和去离子水（10L左右）。PBS和去离子水可高压灭菌，sheath桶和装DI水的5L小桶依次用75％ 医用酒精和无菌去离子水各涮洗三次，然后将无菌PBS和去离子水分别注入相应桶内即可。 2、房间在分选前紫外灯照射15－20分钟；用1:50新洁尔灭拖地；用75％ 医用酒精擦拭工作台和收集架；用75％ 医用酒精喷洒分选细胞收集区和上样区。 二、开机和管道的消毒 1、将Sheath液换为活性氯浓度为0.5% 的次氯酸钠溶液（不要

用 CD3/CD28 做好 T 细胞激活与扩增

细胞筛网置于培养皿中，取小鼠脾脏放置于筛网中，加入 5ml 达优小鼠淋巴细胞分离液，对脾脏轻轻进行研磨（注：此步操作要快，避免分离液蒸发）； 2. 把悬有脾脏细胞的的分离液立即转移至 15ml 离心管中，随后在分离液上层轻轻覆盖 500-1000μl 的 RPMI1640 培养基（保持分离液与培养基分界明显）； 3. 室温，水平转子 800g 离心 30 分钟，设置离心机为缓升缓降； 4. 离心结束后吸出淋巴细胞层（白膜层），加入 10ml RPMI1640 洗涤一遍细胞，250g 离心 10

磁珠分选柱手工操作分离小鼠CD4+ CD25+抑制性细胞

实验材料： 1. 小鼠 2. HBSS洗涤缓冲液 3. MACS缓冲液 4. CD8a（Ly-2）磁珠 5. 结合缓冲液 6. biotin-抗CD25（7D4） 7. Streptavidin-PE 8. 抗PE磁珠 9. 完全RPMI培养基 10. 小鼠CD3+ T细胞富集柱和1×纯化柱缓冲液 11. 15ml离心管，无菌 12. autoMACS系统和分选柱