- ￥2340
- 西格
- XG-P3095
- 国产
- 2025年07月07日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
58
- 保质期：
3 年
- 供应商：
上海西格
- 保存条件：
-20°C
- 规格：
50 ug
描述：
DNA 错配修复系统（MMR）主要由三种蛋白组成，包括 MutS、MutL 和 MutH。其中 MutS 负责识别错配或未结合位点并与之结合，随后 MutL 蛋白与 MutS-DNA 形成复合体，增强其稳定性，并激活 MutH 的内切酶活性，协同解旋酶和单链结合蛋白将错配序列切除。ttMutL 蛋白是一种分离自嗜热栖热菌（Thermus thermophilus）的DNA 错配修复蛋白，它在最适温度 65-75℃ 范围内，具有依赖于 DNA 的 ATPase 活性，在 DNA 错配修复中能够介导 MutS 和 UvrD 发挥作用，因此其在错配修复中发挥重要作用。
储存：-20℃可保存 3 年。
Storage Buffer：
20mM Tris-HCl，pH7.5
200mM NaCl
5mM DTT
25%甘油
| 货号 | 产品名称 | 规格 |
| XG-P3095 | Tth MutL Protein | 50 ug |
1、变性温度和时间：
Tth MutL Protein保证模板DNA解链完全是保证整个PCR扩增成功的关键。加热90~95°C, 30~60s，再复杂的DNA 分子也可变性为单链。温度过高或高温持续时间过长，可对Taq酶活性和dNTP分子造成损害。
2、复性温度和时间:
PCR扩增特异性取决于复性过程中引物与模板的结合。复性温度越高，产物特异性越高。复性温度越低，产物特异性越低。需根据引物的Tm值具体设定。
3、延伸温度和时间:
一般位于Taq酶最适作用温度70~75°C之间。引物小于16个核苷酸时，过高的延伸温度不利于引物与模板的结合，可以缓慢升温到70~75°C。延伸反应时间，可根据待扩增片段的长度而定，小于1kb, 1min足够；大于1kb需加长延伸时间。Taq酶可根据1kb/min增加时间。这里需要注意，延伸时间过长可能出现非特异扩增。因此需要设置恰到好处的延伸时间。
4、循环数:
其他参数选定后，PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。理论上说20〜25次循环后，PCR产物的积累即可达到最大值，实际操作中由于每步反应的产率不可能达到100%，因此不管模板浓度是多少，20~30次是比较合理的循环次数。循环次数越多，非特异扩增增加。
PCR的特点：
特异性强：使用两对引物进行扩增提高了特异性，第一轮PCR中由外引物错配产生非特异性产物，同时在第二轮PCR中内引物与错误片段配对扩增的概率极低，降低了扩增多个靶位点的可能性。
灵敏度高：进行两轮PCR扩增，可以执行更多的循环，从低拷贝样本中扩增得到足量的产物，克服了单次扩增平台期限制，提高PCR的灵敏度。
降落PCR与温度梯度PCR的区别：
降落PCR与温度梯度PCR都是对反应体系中的退火温度进行优化，但两者在原理上有所不同。
温度梯度PCR是为了找到最适的退火温度，设置不同的退火温度进行多管PCR，将其分别放置在PCR仪中的不同温度模块进行反应，最终找到最适的退火温度，并进一步以此退火温度进行普通PCR扩增。
降落PCR是为了提高反应的特异性，通过设计一系列不断降低的退火温度，在同一PCR管内进行PCR扩增，最终获得大量的特异性扩增产物。
与温度梯度PCR相比，降落PCR更有优势。温度梯度PCR需要多次反应或多管反应找到最适的退火温度，之后还需以找到的最适退火温度再次进行PCR，才能得到较好的扩增效果，操作比较繁琐。降落PCR只需一次反应就可以获得很好的扩增效果，避免了对每对引物进行最适退火温度的优化和测定工作。
降落PCR适用于不确定引物的最适Tm值，或引物扩增效果不佳时，不了解目的模板同源性程度，使用降落PCR可以快速、特异的得到目的扩增片段。根据不同实验的需要，降落PCR还可与其它PCR方法同时使用，如实时定量降落PCR、竞争降落PCR等。
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文献和实验MutSDNA Interactions and DNase Protection Analysis with Surface Plasmon Resonance
of the process, including enabling MutS to dissociate from the mismatch, probably through a conformational change (2 ) and for MutSL-DNA interactions (3 ,4 ). In addition to mismatch recognition, the protein has significant affinity for normal DNA
度提高了 1000 倍（见参考文献 [ 12 ] 的述评）。在大肠杆菌中，DNA 错配修复由 MutS 结合于错配位点引发，接着是 MutH 依赖于 MutL 的激活。激活的 MutH 在半甲基化的 d (GATC) 位点切开未甲基化的（即刚复制的）链 。这个位点可能在错配位点的上游或下游几百个碱基对处。切开的 DNA 链在螺旋酶 Ⅱ 的协助下，被四个核酸外切酶之一以外切方式降解，直到并超过错配位点。被移除的片段随后被 DNA 聚合酶 Ⅲ 和 DNA 连接酶合成新片段取代（和修复）。 MutH 是序列
(3)双链DNA与寡核苷酸的熔点短于25bp的双链寡核苷酸Tm = 2 (A + T) + 4 (G + C)长于25bp的双链寡核苷酸Tm = 81.5 + 16.6 ( lg[J+] ) + 0.41 (%GC) - (600/N) - 0.63 (%formamide)N -- 引物的长度(以碱基数计算)J+ -- 单价阳离子浓度(4)DNA与表达蛋白之间分子量换算1 kb DNA = 333 amino acid ≈3.7 × 104 Da10,000 Da Protein ≈ 270 bp
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