- ￥780 - 5460
- 西格
- XG-P3070
- 国产
- 2025年07月15日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
28
- 保质期：
2 年
- 供应商：
上海西格
- 保存条件：
-20°C
- 规格：
250U /2500U
| 规格： | 250U | 产品价格： | ￥780.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 2500U | 产品价格： | ￥5460.0 |
| 货号 | 产品名称 | 规格 |
| XG-P3070 | Exonuclease T | 250U |
| XG-P3070 | Exonuclease T | 2500U |
核酸外切酶 T（Exo T），又称为 RNase T，是一种单链 RNA 或 DNA 特异性核酸酶，该酶需要游离的3′ 末端，以 3′-5′ 方向去除核苷酸。核酸外切酶 T 可用于将含有 3′ 突出末端的 RNA 或 DNA 生成平末端。
本产品是通过重组表达 Exonuclease T 基因而得的高纯度蛋白，无核酸内切酶和其他外切酶的污染。
活性定义：在 100 μl 反应体系中，25℃ 条件下，30 分钟内能从 1 nmol [3H]-标记的聚胸腺嘧啶核苷催化产生0.1 nmol 的可溶于TCA的 DNA 所需要的酶量定义为一个活性单位。
1X Exonuclease T Buffer
50mM KAc，20mM Tris-Ac，10mM Mg(Ac)2，1mM DTT（pH 7.9）
热失活：65°C，20min。
酶储存液：10 mM Tris-HCl, 50 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1mM EDTA, 50% Glycerol, 200 μg/ml BSA, pH 7.5。
储存：置于-20°C 可保存 2 年，避免反复冻融。
注意事项
核酸外切酶 T 对 RNA 和 DNA 具有不同的活性。对于RNA，在标准反应条件下，通过凝胶电泳检测，1 单位核酸外切酶 T 可以完全消化 1.0 pmol 的 rA20。
PCR反应条件优化：
1、变性温度和时间：
Exonuclease T保证模板DNA解链完全是保证整个PCR扩增成功的关键。加热90~95°C, 30~60s，再复杂的DNA 分子也可变性为单链。温度过高或高温持续时间过长，可对Taq酶活性和dNTP分子造成损害。
2、复性温度和时间:
PCR扩增特异性取决于复性过程中引物与模板的结合。复性温度越高，产物特异性越高。复性温度越低，产物特异性越低。需根据引物的Tm值具体设定。
3、延伸温度和时间:
一般位于Taq酶最适作用温度70~75°C之间。引物小于16个核苷酸时，过高的延伸温度不利于引物与模板的结合，可以缓慢升温到70~75°C。延伸反应时间，可根据待扩增片段的长度而定，小于1kb, 1min足够；大于1kb需加长延伸时间。Taq酶可根据1kb/min增加时间。这里需要注意，延伸时间过长可能出现非特异扩增。因此需要设置恰到好处的延伸时间。
4、循环数:
其他参数选定后，PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。理论上说20〜25次循环后，PCR产物的积累即可达到最大值，实际操作中由于每步反应的产率不可能达到100%，因此不管模板浓度是多少，20~30次是比较合理的循环次数。循环次数越多，非特异扩增增加。
PCR的特点：
特异性强：使用两对引物进行扩增提高了特异性，第一轮PCR中由外引物错配产生非特异性产物，同时在第二轮PCR中内引物与错误片段配对扩增的概率极低，降低了扩增多个靶位点的可能性。
灵敏度高：进行两轮PCR扩增，可以执行更多的循环，从低拷贝样本中扩增得到足量的产物，克服了单次扩增平台期限制，提高PCR的灵敏度。
降落PCR与温度梯度PCR的区别：
降落PCR与温度梯度PCR都是对反应体系中的退火温度进行优化，但两者在原理上有所不同。
温度梯度PCR是为了找到最适的退火温度，设置不同的退火温度进行多管PCR，将其分别放置在PCR仪中的不同温度模块进行反应，最终找到最适的退火温度，并进一步以此退火温度进行普通PCR扩增。
降落PCR是为了提高反应的特异性，通过设计一系列不断降低的退火温度，在同一PCR管内进行PCR扩增，最终获得大量的特异性扩增产物。
与温度梯度PCR相比，降落PCR更有优势。温度梯度PCR需要多次反应或多管反应找到最适的退火温度，之后还需以找到的最适退火温度再次进行PCR，才能得到较好的扩增效果，操作比较繁琐。降落PCR只需一次反应就可以获得很好的扩增效果，避免了对每对引物进行最适退火温度的优化和测定工作。
降落PCR适用于不确定引物的最适Tm值，或引物扩增效果不佳时，不了解目的模板同源性程度，使用降落PCR可以快速、特异的得到目的扩增片段。根据不同实验的需要，降落PCR还可与其它PCR方法同时使用，如实时定量降落PCR、竞争降落PCR等。
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