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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
27
- 保质期:
12个月
- 供应商:
上海西格
- 保存条件:
2-8℃
- 规格:
2000U /40KU
| 规格: | 2000U | 产品价格: | ¥468.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 40KU | 产品价格: | ¥7020.0 |
| 货号 | 产品名称 | 规格 |
| XG-P2996 | RNaseOUT-RNase Inhibitor (40 U/μl) | 2000U |
| XG-P2996 | RNaseOUT-RNase Inhibitor (40 U/μl) | 40KU |
描 述 :
TRzol试剂是直接从细胞或组织中提取总RNA的试剂。它在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性。加入氯仿后离心,样品分成水样层和有机层。RNA存在于水样层中。收集上面的的水样层后,RNA可以通过异丙醇沉淀来回收。
无论是人、动物、植物还是细菌组织,该方法对少量及大量的组织和细胞均有较好的分离效果。TRzol试剂操作上的简单性允许同时处理多个的样品。所有的操作可以在一小时内完成。TRzol抽提的总RNA能够避免DNA和蛋白的污染。故而能够做RNA印迹分析、斑点杂交、poly(A)+选择、体外转录、RNA酶保护分析和分子克隆。
TRzol试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。例如,从大鼠肝脏抽提的RNA通过琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙锭染色,可见许多介于7 kb和15 kb之间不连续的高分子量条带(mRNA和hnRNA成分),两条优势核糖体~5kb (28S)和~2kb(18S),低分子量RNA介于0.1和0.3kb之间 (tRNA,5S)。当抽提的RNA用TE稀释时其A 260 /A 280 比值≥1.8。
产品储存:TRzol在室温下能稳定保存12个月。尽管如此,为达到最佳效果,我们建议保存在2-8℃的环境下。
PCR反应基本步骤:
一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成,每个循环包括以下3个步骤:
变性(Denaturation):
利用高温(93-98℃)使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前,通常加热长一些时间以确保模板和引物完全分离,仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟,接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。
退火或称接合,复性(Annealling):
在DNA双链分离后,降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。
延伸(Extension):
DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr(来自于嗜热菌Thermus brockianus)约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。
PCR 反应需要使用哪些试剂?
一、模板DNA:PCR反应需要模板DNA,如从细胞、组织、血液中提取DNA等;
二、引物:PCR反应的两个引物,分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域,引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物;
三、dNTPs:PCR反应中需要四种dNTPs,包括脱氧腺苷酸(dATP)、脱氧胸苷酸(dCTP)、脱氧鸟苷酸(dGTP)、脱氧胞嘧啶酸(dTTP),用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程,用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增;四、Taq DNA聚合酶:PCR反应需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等,用于扩增DNA链;
五、PCR buffer溶液:对PCR反应具有缓冲作用,调节反应pH,硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛,可增强PCR反应特异性,从而提高反应效率;
六、酶切体系:PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤,常常需要进行酶切操作。
七、MARK:一种分子量标准,用来判别DNA片段大小的工具。
八、DNA纯化试剂盒:用于纯化PCR反应产物;
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