产品介绍: Protein G Magnetic Beads 是大小均匀,具有极好分散度的,表面共价缀合超纯(纯度>97%)的重组蛋白 G 的二氧化硅基质超顺磁珠。这种磁珠是经过专门设计,并经过严格质量管理检测的,主要用于当使用的一级抗体确定时,用于免疫沉淀和细胞分选。 同时,也被广泛用于从血清样品,腹水,血浆或组织培养上清中快速和有效的一步纯化多个种类的IgG 蛋白。表1总结了本磁珠的结合亲和力和特异性。 产品特点: ·适用于快捷,简便的一步高通量程序;无需纯化柱或过滤器,或者重复的移液或离心(Fig.1) ·由于磁珠的亲水性表面,非特异性结合率极低 ·极高的结合容量 ·对样本体积要求低,便于自动化操作
·性价比高
产品属性:
缓冲液成分: ·.Protein G Beads (悬浮在 10 mM Tris, 0.15 M NaCl, 0.1% BSA,1 mM EDTA, pH7.4, 0.1% NaN3 缓冲液中) ·1x Protein G Binding/Washing Buffer (57.7 mM Na2HPO4,42.3 mM NaH2PO4, pH 7.0) ·1x Protein G Elution Buffer (0.2 M Glycine/HCl,pH 2.5) ·1x Protein G Neutralization Buffer (1.0 M Tris-HCl, pH 9.0) 所需耗材: 磁力分离器(适用于手动操作):根据实验时生物样品的体积,使用者可以选择以下不同型号的磁力分离器:8 孔磁力架可以容纳 8 个单独的 1.5-2.0 ml离心管; 24 孔磁力架可以容纳 24 个单独的 1.5-2.0 ml 离心管; 4 孔磁力-15 可以容纳4 个单独的15ml 离心管; 4 孔磁力架-50 可以容纳四个单独的 50 ml 离心管。 操作过程: 此过程可被等比例放大或缩小 提示: 1. 该方案是经过优化的,可用于纯化来自不同来源的大多数IgG抗体。然而, 由于没有两种抗体完全相同,因此不可能为所有IgG纯化设计一个通用试剂 盒。为了获得最佳结果,每个用户必须根据故障排除部分中的建议,确定纯 化单个抗体时的最佳工作条件,尤其是弱结合抗体(见表1)。 2. 为确保离子强度和pH值的最佳结合条件,有必要在纯化前用Binding/ Washingbuffer按照至少1:1比例稀释血清样品、腹水或组织培养物。通 过离心或 0.2μ m过滤器过滤,去除样品中的任何不溶性物质。 3. 在纯化IgG之前,用户应将试剂盒中包含的所有试剂平衡至室温。
货号
产品名称
规格
XG-P2767
Protein G Magnetic Beads蛋白G磁珠
1ml(50mg/ml)
PCR反应条件优化: 1、变性温度和时间: Protein G Magnetic Beads蛋白G磁珠保证模板DNA解链完全是保证整个PCR扩增成功的关键。加热90~95°C, 30~60s,再复杂的DNA 分子也可变性为单链。温度过高或高温持续时间过长,可对Taq酶活性和dNTP分子造成损害。 2、复性温度和时间: PCR扩增特异性取决于复性过程中引物与模板的结合。复性温度越高,产物特异性越高。复性温度越低,产物特异性越低。需根据引物的Tm值具体设定。 3、延伸温度和时间: 一般位于Taq酶最适作用温度70~75°C之间。引物小于16个核苷酸时,过高的延伸温度不利于引物与模板的结合,可以缓慢升温到70~75°C。延伸反应时间,可根据待扩增片段的长度而定,小于1kb, 1min足够;大于1kb需加长延伸时间。Taq酶可根据1kb/min增加时间。这里需要注意,延伸时间过长可能出现非特异扩增。因此需要设置恰到好处的延伸时间。 4、循环数: 其他参数选定后,PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。理论上说20〜25次循环后,PCR产物的积累即可达到最大值,实际操作中由于每步反应的产率不可能达到100%,因此不管模板浓度是多少,20~30次是比较合理的循环次数。循环次数越多,非特异扩增增加。