C2674*SIGMA*胶原蛋白酶

说明
一般描述
胶原酶是一种蛋白酶，可切割三螺旋结构的蛋白，即胶原蛋白。组织胶原酶有三种类型，它们属于基质金属蛋白酶（MMP）家族。[1]来自溶组织梭菌（ Clostridium histolyticum ）的胶原酶具有非常强的活性，它在低至4-10℃的温度下可从两端消化胶原蛋白。[2] 粗制胶原酶混合物含有两种主要类型的酶，即胶原酶和梭菌蛋白酶。[3]
应用
来自溶组织梭菌（ Clostridium histolyticum ）的胶原酶被用于以下应用：

足细胞分离[4]
用于酶催化法的对比[5]
用于免疫细胞化学的组织制备[6]
睾丸精子提取[7]
制备单细胞悬浮液[8]
免疫荧光法[9]

本品适用于人类肿瘤、小鼠肾脏、人类成人和胎儿的脑、肺和许多其他上皮组织的解离。 它还被证明适用于肝脏和肾脏灌注研究、胰腺消化、非实质性大鼠肝细胞的分离、以及肝细胞制备。 胶原酶也已用于制备动脉组织，以对晚期糖基化终产物进行研究。 该酶用于（浓度约为1mg/ml）对肝细胞的释放进行检测。消化浓度范围为0.1至5mg/mL。

适用于制备用于测序的单细胞悬液。
喹/啉生化/生理作用
每摩尔胶原蛋白酶被4g原子钙活化。 它被乙二醇-双（β-氨基乙基醚）-N，NN′,N′-四乙酸，β-巯基乙醇、谷胱甘肽、巯/基/乙/酸和8-羟基喹/啉抑制。
胶原酶产品是一种由溶组织梭菌( C.histolyticum)分泌的酶的混合物，分泌酶中10-18种化合物成分的相对比例在不同产品中有所差异。 主要成分是两种胶原酶、梭菌蛋白酶和中性蛋白酶。 这些酶的协同作用可降解胶原蛋白和其他细胞内物质。胶原酶和中性蛋白酶的作用是细胞从组织有效释放所必需的。 各种类型的胶原蛋白是胶原酶的天然底物。
制备说明
该胶原酶来自溶组织梭菌（Clostridium histolyticum）的培养滤液。培养滤液被认为含有至少7种不同蛋白酶，分子量范围为68-130 kDa。本品为I-A型。其溶液通常使用TESCA缓冲液（含有50 mM TES，0.36 mM氯化钙，在37℃时pH 7.4）制备，浓度为1-2 mg/mL。
其他说明
一个胶原蛋白消化单元（CDU）从牛跟腱胶原蛋白中释放的肽链量和1.0 μ亮氨酸，5小时，pH7.4,37℃，在钙离子存在下的茚三酮颜色相同。一个 FALGPA水解单元每分钟，25℃，水解1.0 μmole 呋喃基丙烯酰-Leu-Gly-Pro-Ala。一个中性蛋白酶单元水解酪蛋白，产生颜色和1.0 μmole 酪氨酸每5小时，pH7.5,37℃下产生的相同。一个梭菌蛋白酶单元在DTT存在下，pH7.6,25℃，每分钟水解1.0 μmole BAEE。
免责声明
本品在-20°C下可稳定保存一年。在37℃、50℃和-20℃下保存30天，其FALGPA或蛋白酶活性没有损失。粗制胶原酶溶液分装品（ 10 mg/mL）经快速冷冻可保持稳定，并且可在-20℃下冷冻保存。进一步冻融循环会损坏溶液。 本品在冰上放置7小时，可保留100％活性。