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蛋白定量(TP)测定试剂盒

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  • 2025年07月10日
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      信帆生物

    蛋白定量(TP)测定试剂盒
    (考马斯亮蓝法)
    一、测定原理:
    蛋白质分子具有-NH3+基团,当棕红色的考马斯亮蓝显
    色剂加入蛋白标准液或样品中时,考马斯亮蓝染料上的阴离
    子与蛋白-NH3+结合,使溶液变为蓝色,通过测定吸光度可
    计算出蛋白含量。
    二、试剂及配制:(50 /48 A045-2-1
    试剂一:考马斯亮蓝贮备液:30mL×1 瓶,4℃保存 6 个月。
    考马斯亮蓝显色液的配制:按考马斯亮蓝贮备液:蒸馏水=
    14 的比例进行配制(即 5 倍稀释),用多少配
    多少,现用现配。
    试剂二:蛋白标准液 0.5mL×1 支(浓度见标签),4℃保存
    1 个月(如要延长保存时间,请将标准液分装后
    -20℃冷冻可保存 6 个月)。
    三、试剂及配制:(100 /96 A045-2-2
    试剂一:考马斯亮蓝贮备液,60mL×1 瓶,4℃保存 6 个月。
    考马斯亮蓝显色液的配制:按考马斯亮蓝贮备液:蒸馏水=
    14 的比例进行配制(即 5 倍稀释),用多少配
    多少,现用现配。
    试剂二:蛋白标准液 0.5mL×1 支(浓度见标签),4℃保存
    1 个月(如要延长保存时间,请将标准液分装后
    -20℃冷冻可保存 6 个月)。
    四、操作步骤:
    1、样本前处理:
    ①、组织样本:准确称取待测组织的重量,按重量(g:
    (mL)=1:9 的比例加入 9 倍体积的匀浆介质(推荐
    0.1mol/L pH 值为 7.0-7.4 的磷酸盐缓冲液或 0.9%的生
    理盐水),冰水浴条件机械匀浆,2500 /分,离心 10
    分钟,取上清液(10%匀浆上清)待测。(注:不同样
    本匀浆上清测定时最适浓度不同,可按需要将匀浆上清
    稀释后测定,选择测定 OD 值接近标准 OD 值时的样本
    浓度;匀浆介质不局限于上述所列的生理盐水和磷酸盐
    缓冲液,其它的提取液(原则上不干扰试剂反应的都可
    以)一样可以检测
    ②、血清(浆)样本:血清(浆)可用生理盐水按血清︰生
    理盐水=149 稀释,待测。
    ③、其它体液样本:按比例稀释,总的来说,测定范围为 0.1
    1.3g/Lmg/mL)为宜,(不同的样本稀释度存在差异),
    请在批量测试前先做 12 个样本的预试。
    六、注意点:
    1、此法灵敏度高,所以样本蛋白浓度必须稀释至 1.3g/L
    1.3mg/mL)以下,在此范围内呈线性关系。
    2、考马斯亮兰法测定组织蛋白时组织匀浆的浓度一般为
    0.5%2%
    3蛋白浓度高的样品需进行稀释或者请用我所双缩脲试剂进
    行测定,双缩脲测试范围为 1080g/Lmg/mL)。
    4、标准液浓度不同此次可能有差异,具体浓度见标签。
    蛋白定量(TP)测定试剂盒
     

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