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- 信帆生物
- XJC5163
- 国产
- 2025年07月12日
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- 文献和实验
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信帆生物
（BCA 法 比色法）
一、试剂组成及配制（50 管/48 样）：
试剂一：粉剂×1 支，稀释液 12.5mL×1 瓶，4℃密封保存 6
个月。试剂一应用液的配制：取试剂一粉剂 1 支与
试剂一稀释液 1 瓶混匀，溶解完全后 4℃待用。
试剂二：250μL×1 支，4℃冷藏密封保存 6 个月。
工作液的配制：按试剂一应用液：试剂二＝50∶1 的比例配
制，混匀后待用，用多少配多少。
试剂三：终止剂贮备液 10mL×1 瓶，4℃冷藏密封保存 6 个
月。终止剂应用液的配制：取终止剂贮备液用蒸馏
水 5 倍稀释后备用，4℃冷藏。
试剂四：蛋白标准：蛋白标准液 0.2mL×1 支（浓度见标签），
4℃保存 1 个月（如要延长时间请将标准液分装后
-20℃冷冻可保存 6 个月）。
二、试剂组成及配制（100 管/96 样 A045-3-2）：
试剂一：粉剂×2 支，稀释液，12.5mL×2 瓶，4℃密封保存 6
个月。试剂一应用液的配制：取试剂一粉剂 1 支与
试剂一稀释液 1 瓶混匀,溶解完全后 4℃待用。
试剂二：250μL×2 支，4℃冷藏密封保存 6 个月。
工作液的配制：按试剂一应用液：试剂二＝50∶1 的比例配
制，混匀后待用，用多少配多少。
试剂三：终止剂贮备液 20mL×1 瓶，4℃冷藏密封保存 6 个
月。终止剂应用液：取终止剂贮备液用蒸馏水 5 倍
稀释后备用，4℃冷藏。
试剂四：蛋白标准液 0.2mL×1 支（浓度见标签），4℃保存 1
个月（如要延长时间请将标准液分装后-20℃冷冻
可保存 6 个月）。
三、样本前处理：
1、动物组织样本：准确称取组织重量，按重量（g）：体积
(mL)=1:9 的比例，加入 9 倍体积的匀浆介质（匀浆介质
推荐 0.1mol/L pH7.4 的磷酸盐缓冲液或生理盐水等），
冰水浴条件下机械匀浆，2500 转/分，离心 10 分钟，取
上清液再用匀浆介质按 1:9 稀释成 1%组织匀浆，或按 1
︰19 稀释成 0.5%的组织匀浆，待测（具．体．浓．度．以．预．实．
验．为．准．）。
2、植物组织样本：准确称取组织重量，按重量（g）：体积
(mL)=1:9 的比例，加入 9 倍体积的匀浆介质（匀浆介质
推荐 0.1mol/L pH 7.4 磷酸盐缓冲液或生理盐水等），
冰水浴条件下机械匀浆，3500 转/分，离心 10 分钟，取
上清液再用生理盐水按 1:9 稀释成 1%组织匀浆，或按 1
︰19 稀释成 0.5%的组织匀浆，待测（具．体．浓．度．以．预．实．
验．为．准．）。
3、血清（浆）样本：按血清（浆）︰生理盐水=1︰49 的比
例稀释（或 1:99 稀释），待测（具．体．浓．度．以．预．实．验．为．准．）。
4、其它液体样本：按比例稀释，测定范围为 20～2000μg/mL，
（不同的样本稀释度不一样），请在批量测试前先做 1～
2 个样本的预实验（具．体．浓．度．以．预．实．验．为．准．）。
注：组织提取时，匀浆介质不局限于上述所列的生理盐水和
磷酸盐缓冲液，其它的（原则上不干扰试剂反应的都可
以）一样可以检测。
六、测定原理：
碱性条件下，蛋白将 Cu 2+还原为 Cu +，Cu +与 BCA 试剂
形成紫色的络合物，562nm 处有最大吸收峰，依据吸光度与
浓度成正比，通过测吸光度即可计算待测蛋白的浓度。
八、产品特点：
1、快速简单：比经典的 Lowry 法快 4 倍而且更加方便；
2、灵敏度高：检测浓度下限达到 20μg/mL，最小检测蛋白量达
到 0.5μg，在 20～2000μg/mL 浓度范围内有良好的线性关系；
3、本法测定蛋白浓度不受绝大部分化学物质的影响，包括不受
离子型和非离子型去污剂影响，可以兼容样品中高达 5%的
SDS，5%的 Triton X-100，5%的 Tween 20, 60, 80。
4、检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定
量。
5、BCA 蛋白质定量检测试剂在蛋白质的表达纯化，结构和功能
的研究工作中，蛋白质的定量随处可见。BCA（bicinchoninic
acid）蛋白质检测试剂是当前比 Lowry 法更优越的专用于检
测总蛋白质含量的产品。该方法以快速灵敏、稳定可靠且对
不同种类蛋白质变异系数甚小而深受专业人士的青睐，是目
前国际上最流行的蛋白质定量检测方法。
6、鉴于试剂盒灵敏度高，试剂配制所用器皿必须无蛋白污染。
7、标准液浓度会有变化，请按标准液管壁标签上标示实际浓度
计算。
附录Ⅰ：血清（浆）中总蛋白浓度测定
一、样本前处理：
血清（浆）可用生理盐水按血清（浆）︰生理盐水=1︰49
稀释（或 1:99 稀释），待测。
附录Ⅱ：组织及细胞中总蛋白浓度测定
一、样本前处理：
1、动物组织样本前处理：准确称取组织重量，按重量（g）：
体积(mL)=1:9 的比例，加入 9 倍体积的匀浆介质（匀浆
介质推荐 0.1mol/L pH7.4 的磷酸盐缓冲液或生理盐水
等），冰水浴条件下机械匀浆，2500 转/分，离心 10 分
钟，取上清液再用匀浆介质按 1:9 稀释成 1%组织匀浆，
或按 1︰19 稀释成 0.5%的组织匀浆，待测（具．体．浓．度．以．
预．实．验．为．准．）。
2、植物组织样本前处理：准确称取组织重量，按重量（g）：
体积(mL)=1:9 的比例，加入 9 倍体积的匀浆介质（匀浆
介质推荐 0.1mol/L pH 7.4 磷酸盐缓冲液或生理盐水
等），冰水浴条件下机械匀浆，3500 转/分，离心 10 分
钟，取上清液再用生理盐水按 1:9 稀释成 1%组织匀浆，
或按 1︰19 稀释成 0.5%的组织匀浆，待测（具．体．浓．度．以．
预．实．验．为．准．）。
3、培养细胞样本前处理：将收集好的细胞用等渗缓冲液（推
荐 0.1mol/L pH7～7.4 磷酸盐缓冲液或生理盐水）清洗
1～2 次；1000 转/分,离心 10 分钟,弃上清,留细胞沉淀，
加入匀浆介质（推荐加入 0.1mol/L pH7～7.4 磷酸盐
缓冲液或生理盐水），冰水浴条件下超声破碎(功率 300W,
5 秒/次,间隔 30 秒,重复 3～5 次)(也可根据不同仪器细胞
超声处理的步骤进行)或手动匀浆，制备好的匀浆液不离
心，待测（如浊度较大也可离心后测定，具．体．浓．度．以．预．
实．验．为．准．）。
附录Ⅲ：标准曲线的制作
1、前处理：
将 52.4g/L 蛋白标准液用蒸馏水稀释成不同浓度：10000、
5000、2500、1000、500、250、100、50、25、0μg/mL。
[注]： 52.4g/L 高浓度蛋白标准液老师需自备（或另购），标
准曲线客户可以不做，直接用计算公式进行计算。
总蛋白定量测试盒
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文献和实验【求助】新手 请问western-blot测NF-KB、FLT3是用总蛋白提取试剂盒吗
xungufeng820 各位大侠： 小弟是新手，师兄们也没做过的，不知western-blot测NF-KB、FLT3是用总蛋白提取试剂盒吗？急盼回复！万分感谢！ snowxyh 我用过总蛋白提取试剂盒提蛋白，之后western-blot检测NF-KB，但是感觉这样得到的蛋白浓度很稀，需要比较大的上样量才能检测出来，个人感觉，还是用传统的细胞匀浆裂解，离心提取上清，这样得到的蛋白浓度大，做试验结果好
在 RIPA 不可溶组分中，如果样品又是研磨困难的组织样品，则优先选择对膜蛋白和小分子量蛋白提取效率更高且不需要匀浆仪的 Invent 柱式法工具进行总蛋白提取[1]。 * 目标蛋白在某个特定细胞器上（内质网，高尔基体，溶酶体，线粒体，内体等）表达，且蛋白表达量较低，若用总蛋白检测时条带较弱，则推荐使用 Invent 柱式法工具富集特定细胞器蛋白后再检测，提高检出效率。 * 研究蛋白定位或研究蛋白转运过程，推荐使用 Invent 柱式法工具进行细胞组分分离，将样品分离为不同组分如分成细胞核，细胞浆，细胞
实验室中时常听到这样的困惑，「明明通过免疫荧光（IF）能看到目的蛋白表达在细胞核膜上的表达，但为什么不论用总蛋白还是核蛋白进行 WB 检测，都无法检测到目的蛋白？」 类似这样的问题，你是否也深有感触？ 实际操作过程中，是否遇到过免疫荧光有结果而蛋白印迹却没条带的情况？什么原因导致了这种情况？又该如何处理？ 一、IF & WB 免疫荧光（IF）和免疫印迹（WB）都是利用抗原和抗体的特异性结合对目的蛋白质进行检测。IF 采用抗体和荧光检测固定细胞或组织中目的
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