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- 信帆生物
- XJC5128
- 国产
- 2025年07月13日
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信帆生物
一、测定意义：
增高：大多数急性胰腺炎病人及慢性肾功能衰竭病人的胰蛋
白酶明显增高，半数以上的胰腺癌及慢性胰腺炎病人
的胰蛋白酶也增高。但也有 20％非胰性腹痛病人，
特别是胆囊炎及十二指肠溃疡穿孔病人，胰蛋白酶也
会增高
降低：慢性胰腺炎，胆道疾病、慢性胆囊炎等。
二、测定原理：
胰蛋白酶（trypsin）能催化水解底物精氨酸乙酯的酯链，
使其在 253nm 处吸光度值升高，根据吸光度的变化可以计算
出酶的活力。
三、试剂盒的组成和配制：（25 管/24 样，货号 A080-2-1）
试剂一：胰蛋白酶底物，粉剂×2 瓶；稀释液 30mL×2 瓶，2～
8℃条件下 6 个月内有效。
底物应用液的配制：临用前将 1 支粉剂加入到 1 瓶稀释液中，
充分溶解后，待用。底物应用液必须现用现配，2～
8℃条件下 24 小时内有效。
试剂二：样本匀浆介质，60mL×1 瓶；2～8℃保存条件下 6
个月内有效。
四、试剂盒的组成及配制：（50 管/48 样，货号 A080-2-2）
试剂一：胰蛋白酶底物，粉剂×3 支；稀释液 30mL×3 瓶，2～
8℃条件下 6 个月内有效。
底物应用液的配制：临用前将 1 支粉剂加入到 1 瓶稀释液中，
充分溶解后，待用。底物应用液必须现用现配，2～
8℃条件下 24 小时内有效。
试剂二：样本匀浆介质，60mL×2 瓶；2～8℃保存条件下 6
个月内有效。
加入样本的同时开始计时，混匀后，倒入 0.5cm 光径的石英
比色皿中，于 253nm 处测定吸光度 OD 值，记下 30 秒时的吸光
度 OD 值 A1；将比色皿置于比色槽中不动，同时将比色槽温度恒
定保持在 37℃；如果比色槽无法恒温在 37℃，可将比色皿中的
反应液倒入预先编号的原试管中，放入 37℃水浴箱中准确水浴
20 分钟，于 20 分 30 秒时记录吸光度 OD 值 A2，计算△A=A2-A1。
[注]：1、在预试过程中，如果△A 测定＜0.050，则将样本取样量
或样本浓度相应加大后，再次进行测定。
2、在预试过程中，如果△A 测定＞0.250，则将样本用样本
匀浆介质（试剂二）稀释后，再次进行测定。
3、详细操作过程：
①、将紫外分光光度计于 253nm 处，0.5cm 光径石英比
色皿，用双蒸水调零；(石英比色皿准备两只,一只用
于调零,一只用于测定)。
②、将胰蛋白酶底物应用液 37℃预温 5 分钟以上；
③、往相应编号的试管中加入 a*mL 新鲜血清（浆），吸
取胰蛋白酶底物应用液 1.5mL 冲入试管中，快速混
匀，并计时；(空白管取试剂二 a*mL，吸取工作液
1.5mL 冲入试管中，快速混匀，并计时，其它操作与
测定管相同)
④、迅速倒入石英比色皿中，紫外分光光度计，253nm
处比色，30 秒时读取吸光度值 A1；
⑤、将此比色液倒入原试管中置 37℃准确水浴 20 分钟，
再迅速倒入石英比色皿中，20 分 30 秒时读取吸光度值
A2；
⑥、求出 2 次吸光度差值（△A=A2-A1）。
4、酶单位定义和计算公式：
①、单位定义：在 pH 8.0，37℃条件下，每毫升血清（浆）
中含有的胰蛋白酶每分钟使吸光度变化
0.003 即为一个酶活力单位。
（二）、组织匀浆中胰蛋白酶活力的测定：
1、样本前处理：
①、胰腺上清液的制备：准确称取胰腺组织，按重量(g):
体积(mL)=1:9 的比例，加入 9 倍体积的匀浆介质，冰
浴条件下机械匀浆， 2500 转/分，离心 10 分钟，取上
清待测。
②、小肠食麋及黏膜上清液的制备：取新鲜的小肠或完全
解冻后的小肠，沿肠壁纵向剪开，用小刀片刮下食麋
及黏膜（整个操作过程放在冰箱保鲜薄膜上操作）。准
确称取食麋及黏膜的重量，按照重量体积比 1︰9（组
织︰样本匀浆介质）在食麋和黏膜中加入样本匀浆介
质，在冰浴条件下机械匀浆， 2500 转/分，离心 10 分
钟，取上清液待测。上清液-20℃以下冷冻保存，15
天内有效。
胰蛋白酶测试盒
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文献和实验［原理］ 在动物胰脏中除了存在胰蛋白酶外，还有另外两种与胰蛋白酶性质相似的蛋白水解酶：胰凝乳蛋白酶和弹性蛋白酶。在胰蛋白酶提取过程中，三者彼此很难分开。需采用合适的方法进一步分离纯化。 从动物胰脏中提取胰蛋白酶，一般是用稀酸将胰腺细胞中含有的胰蛋白酶原提取出来，然后根据等电点沉淀的原理将提取液的pH值调至酸性（pH3.0左右），使大量的酸性
样品：重组胰蛋白酶，比活 4500USP u/mg pro.，上海雅心生物技术有限公司，纯度如图 1 所示。BAEE，Sigma. 图 1. 重组胰蛋白酶的纯度的 SDS-PAGE 鉴定 1. 最适 pH 的研究 准备 pH 为 3~12 的底物 BAEE（0.25 mM），分别测定 rPT 纯酶液的活性，最后结果表示为测定数值占最高酶活的百分比。缓冲液成分依次为 25 mM NaAc-HAc (pH 3~6)，25 mM Tris-HCl (pH 7~8)，25
问：有人说白颜色胰蛋白酶的要比黄颜色的效果好，是吗？我近期买的胰蛋白酶倒是白颜色的，但是不能溶解在PBS中，呈细小的悬浮颗粒状，是GIBCO公司出产的。这会是什么原因呢？望各位师兄师姐回复。 答：以我们的经验确实是这样的，我们做过比较的是白颜色的比较好，究其原因我们认为是黄颜色的胰蛋白酶提纯不够，里面混有杂质所致。
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