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- 2025年07月12日
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信帆生物
二磷酸核酮糖叛化酶(EC 4.1.1.39)是植物光合作用中的一个关键酶，既控制着 CO2的固定，同时又制约着碳素向 Calvin 循环和光呼吸循环分流，其活性的大小直接影响着光合速率。
测定原理：
在 Rubisco 的催化下，1 分子的核酮糖-1,5-二磷酸RuBP)与1分子的 CO, 结合，产生 2分子的 3-磷酸甘油酸(PGA)，PGA 可通过外加的 3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脱氢酶的作用，产生甘油醛-3-磷酸，并使还原型辅酶I(NADH)氧化。因此，340nm 吸光度的变化可计算还原型辅酶 I氧化速率，还原型辅酶I氧化速率可反映 Rubisco 的活性。
自备的仪器和用品:
可见-紫外分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、lmL 石英比色皿、研钵、冰、蒸馏水。
四、试剂的组成和配制:
提取液一: 液体 25mLx1 瓶，4C保存；
提取液二:液体 25mLx1 瓶，4C保存；
试剂一: 30mLx1 瓶，4C保存；
试剂二: 粉剂x1 瓶，-20C保存，临用前加入 12.5mL 试剂一，充分混匀备用，用不完的试剂分装后-20C保存，禁止反复冻融；
试剂三:粉剂x1 瓶，-20C保存，临用前加入 12.5mL 试剂一，充分混匀备用，用不完的试剂分装后-20C保存，禁止反复冻融；
试剂四: 粉剂x1 瓶，-20C保存，临用前加入 1.25mL 试剂一，充分混备用，用不完的试剂分装后-20保存，禁止反复冻融；(注意: 试剂二、三、四济解后，按需分装-20C保存。)
五、样本本处理:
1、总 Rubisco 酶提取:建议称取约 0.1g 样本，加入mL 提取液一，冰浴匀浆后超声破碎 (冰浴，200W.破碎 3s，间歇 7s，总时间 1min)，然后4C，8000g 离心 10min，取上清测定。
胞浆和叶体 Rubisco 的分离: 按照物组织质量(g): 提取液体积(mL)为 1:5-10 的比例(建议称取约 0.1g组织，加入 1mL 提取液一)，冰浴匀浆后于 4C，200g 离心5min，分离并保留沉淀，取上清在4C，8000g 下离心 10min，取上清用于测定胞浆 Rubisco 酶活性: 取沉淀加 1mL 提取液二，震荡溶解后超声破碎(冰浴，200W，破碎 3s，间歇 7s，总时间1min)，然后4C，8000g 离心 10min，取上清测定叶绿体中 Rubisco 酶活性。
建议测定总 Rubisco 活性，按照步1提取液，要分别测定胞和叶绿体中的 Rubisco，则按照步骤2 提取粗液。 (注意:粗酶液制备过程中超声破碎操作使用细胞破碎仪进行。)
1,5-二磷酸核酮糖化酶(Rubisco)试剂盒
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文献和实验尔化学奖。（一）C3途径的反应过程C3途径是光合碳代谢中最基本的循环，是所有放氧光合生物所共有的同化CO2的途径。1.过程 由RuBP开始至RuBP再生结束，共有14步反应，均在叶绿体的基质中进行。全过程分为羧化、还原、再生3个阶段。(1)羧化阶段(carboxylation phase) 指进入叶绿体的CO2与受体RuBP结合，并水解产生PGA的反应过程。以固定3分子CO2为例：3RuBP+3CO2+3H2O PGA + 6H+核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶(Rubisco)具有双重功能，既能使RuBP
所谓工欲善其事必先利其器，做实验也是一样的道理。做免疫组织化学染色，抗体信号弱，再怎么重复也达不到好的效果，不如试试 TSA 酪胺信号放大技术。该技术是一类利用辣根过氧化酶（HRP）对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记的酶学检测方法，可有效放大信号 100-800 倍。该技术可与高性能染料 Alexa Fluor、传统荧光染料和比色检测系统相兼容。上海臻和生物科技有限公司基于 TSA 酪胺信号放大技术开发了一系列自主品牌 EU-BIO 试剂盒，包括不同荧光标记、针对不同一抗种属来源，以及双
：分别是竞争性蛋白质结合分析法[3]、放射性免疫分析法[4]和薄层色谱法[5]。在80年代，放射性免疫分析法得到了广泛的应用和改进，由于这种方法采用放射性核素标记，应用范围受到一定限制，为了进一步提高检测的灵敏度和操作的安全性，进入90年代又陆续发明了各种酶标记法和化学发光法的竞争性ELISA检测试剂盒，这一类检测方法的根本原理都是基于抗体抗原的免疫反应，所有这些试剂盒中采用的抗体全部是兔抗血清或者是经过特异亲和提纯之后的抗cAMP或cGMP的兔多抗，毫无疑问，兔多抗在约四十年的cAMP，cGMP定量
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