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- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
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-20℃保存
- 保质期：
12个月
- 英文名：
Recombinant Minichromosome Maintenance Deficient 3 (MCM3)
- 库存：
100
- 供应商：
科淼生物
- 规格：
50ug/50ug
| 规格： | 50ug | 产品价格： | ￥2180.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 50ug | 产品价格： | ￥3980.0 |
产品英文名称：Recombinant Minichromosome Maintenance Deficient 3 (MCM3)
别名：HCC5; P1-MCM3; P1.h; RLFB; RLF subunit beta; DNA replication licensing factor MCM3; DNA polymerase alpha holoenzyme-associated protein P1
种属：Homo sapiens (Human)
蛋白序列：Ile295~Leu502
标签：N-terminal His Tag
Uniprot：P25205
表达系统：Prokaryotic expression
来源：E.coli
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文献和实验一、原核蛋白表达及纯化 1、怎样提高E.coli中6′His标签蛋白的表达水平？ 6 × His标签蛋白的表达水平低原因可能为：目标蛋白有毒或不稳定，或者是细菌生长过程中不能维持表达结构。有时候，插入片段的5’端序列编码了干扰转录或翻译的元件（比如有反向重复序列而形成茎环结构，掩盖了Shine-Dalgarno序列），在这种情况下，有必要检查和修改表达序列。改变培养基和宿主菌也可能会有所帮助。 外源性蛋白的表达会使宿主菌生长迟缓。高速的转录、翻译重组蛋白所需要的代谢消耗，导致宿主菌生长
从新鲜的培养基上挑选单克隆，少量培养后，2000倍稀释大量培养。 含有疏水基团的重组蛋白往往对宿主菌有毒性。因此，除非有特殊的意义，应当去除插入片段中编码信号肽序列或穿膜区的序列。然而，也有少数包含信号肽的蛋白可以在膜间质少量的表达。这种情况下，建议诱导前培养温度降低为25度。 有些蛋白，尤其是小于10KDa的蛋白在E. coli中不稳定，可能很快被细菌中的蛋白酶降解。克服这种困难的方法包括：降低培养温度到30度；使用一种或多种蛋白酶缺陷的宿主菌；使用QIAGEN公司的表达质粒pQE
、Glu、Ser和Thr的区域，且在该区域附近有某些特定的氨基酸，则该蛋白就会不稳定。这些PEST结构域的磷酸化导致钙的结合能力提高，从而利于钙依赖性蛋白酶对蛋白质的降解。这提示可以在缺乏PEST蛋白裂解系统的E.coli中表达PEST富含蛋白。 减少E.coli中重组蛋白裂解的策略有以下几种：（1）将蛋白质靶向细胞周质或培养基[145，186]；（2）在较低的温度下培养细菌[187]；（3）选用蛋白酶缺陷的菌株[188]；（4）构建N-末端或C-末端融合蛋白[186]；（5）将目的基因多拷贝串联
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