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信帆生物
(测胃液、胃组织)
一、测定原理:
胃蛋白酶可水解蛋白产生含酚的氨基酸,而酚试剂可
被含酚的氨基酸还原成蓝色物质,通过比色可测定胃蛋白
酶活力。
二、试剂盒组成与配制:(50 管/24 样)
试剂一:液体 24mL×1 瓶,4℃保存 3 个月。
试剂二:液体 6mL×2 瓶,4℃保存 1 个月。
试剂三:液体 100mL×1 瓶,4℃保存 3 个月。
试剂四:液体 9mL×2 瓶, 4℃避光保存 2 个月。
试剂五:1mg/mL 酪氨酸标准品贮备液 1mL×1 瓶,标准品
稀释液 20mL×1 瓶,4℃保存 1 个月。
50μg/mL 标准品应用液的配制:取 1mg/mL 标准品贮备
液 50μL 用标准品稀释液稀释至 1mL,即 1︰19
(体积比)稀释,充分混匀后,4℃可保存 10 天。
试剂六:匀浆介质 60mL×2 瓶,4℃保存 1 个月。
三、操作步骤:
1、样本前处理:
①、胃液样本:先做预试,再根据活力大小或直接取胃液
进行检测或用匀浆介质进行适当稀释后再测。
(预试结果请参考附录中的标准曲线)
②、组织样本:准确称取组织重量,按重量(g):体积
(mL)=1:9 的比例,加入 9 倍体积的匀浆介质,
冰水浴条件下机械匀浆,制成 10%的组织匀浆,
2500 转/分,离心 10 分钟,取上清液进行预试
后根据活力大小或直接进行检测或用匀浆介质
进行适当稀释后测定。(预试结果请参考附录中
的标准曲线)
2、样本及试剂在测试前均要平衡至室温(室温在 20℃以上
可放置室温;室温在 20℃以下,可将试剂置于 37℃水
浴中预温 10 分钟)。
胃蛋白酶测试盒
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文献和实验指脊椎动物胃液中的蛋白酶,是典型的肽链内切酶,底物特异性广,但对邻接疏水性氨基酸残基的肽键能相当的水解。等电点在 pH=1附近。活性的最适 pH约为 2(以变性蛋白质做底物时约为 3.5)。在猪中除得到主要成分胃蛋白酶 A( EC3.4.23.1)外也得到胃蛋白酶 B和 C。各种胃蛋白酶都是以无活性的前体物质胃蛋白酶原( pepsinogen) A、 B、 C的形态分泌出来,在胃液的酸性条件下自我催化而激活。胃蛋白酶原 A的等电点为 pH3.7,分子量约 4万。氨基末端的残基
人胃蛋白酶原(PG ) 酶联免疫分析( ELISA ) 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中 胃蛋白酶原(PG ) 的 含量。 实验原理: 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人 胃蛋白酶原( PG ) 水平。用纯化的人 胃蛋白酶原( PG ) 抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入 胃蛋白酶原( PG ), 再与 HRP 标记的 胃蛋白酶
胃蛋白酶原是由主细胞合成的,并以不具有活性的酶原颗粒形式贮存在细胞内。当细胞内充满酶原颗粒时,它对新的酶原的全盛2产生负反馈作用。持续的刺激可使主细胞内的颗粒历释放而完全消失,便分泌仍继续进入,说明酶原也可以不经过颗粒的形式直接释放出来。 分泌入胃腔内的胃蛋白酶原在胃酸的作用下,从分子中分离出一个小分子的多肽,转变为具有活性的胃蛋白酶。已激活的胃蛋白酶对胃蛋白酶原也有激活作用。 胃蛋白酶能水解食物中的蛋白质,它主要作用于蛋白质及多肽分子中含苯丙氨酸或酪氨
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