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-80℃
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90天
- 英文名:
pCMV-SPORT6-Stau1(mouse)(未测通)
- 库存:
100
- 供应商:
科淼生物
- 规格:
0.5ug/0.5ug
| 规格: | 0.5ug | 产品价格: | ¥680.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 0.5ug | 产品价格: | ¥1280.0 |
英文名称:pCMV-SPORT6-Stau1(mouse)(未测通)
货号:KM1046302
图谱:微客服
宿主:大肠杆菌
用途:基因模板
片段类型:cDNA
片段物种:小鼠
原核抗性:Amp
真核抗性:
荧光标记:
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文献和实验1.带有非互补突出端的片段 用两种不同的限制酶进行消化可以产生带有非互补突出端的片段,刀就是最容蜴 克隆的片段。常用的大多数质粒载体均带有由几个不同限制酶的识别序列组成的多克隆位点。由于现有的多克隆位点如此多样,因而几乎总是能找到一种带有与外DNA片段未匹配的限制切位点的载体。于是,采用所谓的定向克隆即可将外源DNA片段插入到载体当中。例如:载体pUC19用BamHl和Hind-Ⅲ进行消化,然后,通过凝胶电泳或大小排阻凝胶层析纯化载体大片段,以使同芤下来的多克
连接反应 (一)外源DNA和质粒载体的连接反应 外源DNA片段和线状质粒载体的连接,也就是在双链DNA5'磷酸和相邻的3'羟基之间 形成的新的共价链。如质粒载体的两条链都带5'磷酸,可生成4个新的磷酸二酯链。但如果质粒DNA已去磷酸化,则吸能形成2个新的磷酸二酯链。在这种情况下产生的两个杂交体分子带有2个单链切口,当杂本导入感受态细胞后可被修复。相邻的5'磷酸和3'羟基间磷酸二酯键的形成可在体外由两种不同的DNA连接
的形成时)外源DNA末端浓度的2倍时,有效重组 体的产量可达到最大。这些条什下,连接反应终产物的大约40%都是由单体质粒与外源DNA所形成的嵌合体。当连接混合物中线瘃质粒的量恒定(j:i=3)而带匹配末端的外源DNA的量递增时,这种嵌合体在连接反应之末的理论产量。 涉及带粘端的线状磷酸化质粒DNA的连接反应应包含: 1)足量的载体DNA,以满足j:i>1和j:i 2)未端浓度等于或稍高于载体DNA的外源DNA,如外源DNA浓度比载体低得多,在效连接产物的数量会
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