- ￥680 - 1280
- KEMOBio
- 进口/国产
- KM1034511
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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-80℃
- 保质期：
90天
- 英文名：
pCDNA3.1-SIRT7(human)-Myc-6×His(1同义突变)
- 库存：
100
- 供应商：
科淼生物
- 规格：
0.5ug/0.5ug
| 规格： | 0.5ug | 产品价格： | ￥680.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 0.5ug | 产品价格： | ￥1280.0 |
英文名称：pCDNA3.1-SIRT7(human)-Myc-6×His(1同义突变)
货号：KM1034511
图谱：微客服
宿主：哺乳细胞
用途：蛋白表达
片段类型：ORF
片段物种：人
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光标记：
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文献和实验1、质粒的概念 质粒（Plasmid）是一种存在于细菌、酵母等微生物细胞中的小型环状双链 DNA 分子，能够独立于宿主染色体进行自我复制，并通常携带对宿主生存非必需但具有特定功能的基因（如抗生素抗性基因）。质粒是分子生物学和基因工程中最重要的工具之一。 质粒根据其用途可以分为多种不同的类型，如用于保存序列信息的克隆质粒（如：pUC 系列质粒），用于表达蛋白的质粒（如哺乳动物细胞表达所用的 pcDNA3.1 系列质粒），用于基因编辑的质粒（如哺乳动物细胞基因编辑所用的 espCas9-2A
限制性酶切位点。3. ShRNA 插入片段中的茎环应当靠近寡核苷酸的中央。4. 5～6 个 T 必须放置在 ShRNA 插入片段尾部以确保 RNA 聚合酶 III 终止转录。5. 在正义链和反义链序列上不能出现连续 3 个或以上的 T。这可能导致 ShRNA 转录的提前终止。下面以 pSUPER 质粒载体设计 ShRNA 为例：1. 选择双酶切位点分别是 BglII-HindIII site。2. pSUPER ShRNA design model：红色部分包含限制性酶切位点，绿色部分为茎环序列。3. shRNA 的引物
通过加入基因组 DNA 模板以及设计好的引物进行目的基因的扩增，得到 PCR 产物后进行琼脂糖凝胶电泳验证条带大小，然后通过胶回收，获得纯化目的片段产物。由于加入保护碱基，回收产物需要进行限制性内切酶切从而暴露黏性末端。2. 线性化质粒：将原始的质粒载体，比如 pcDNA3.1 质粒，选择合适的酶切位点，比如 NheI/KpnI 进行酶切，获得线性化的质粒。酶切体系一般选择 50ul，试剂加好之后 37°C 孵育 6~8 小时，或适当延长时间，保证质粒酶切完全。每隔一段时间振荡一下并离心以防液滴蒸发
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