- ￥680 - 1280
- KEMOBio
- 进口/国产
- KM102070
- 2025年07月12日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-80℃
- 保质期：
90天
- 英文名：
pET-30c(低拷贝)
- 库存：
100
- 供应商：
科淼生物
- 规格：
0.5ug/0.5ug
| 规格： | 0.5ug | 产品价格： | ￥680.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 0.5ug | 产品价格： | ￥1280.0 |
英文名称：pET-30c(低拷贝)
货号：KM102070
图谱：微客服
宿主：大肠杆菌
用途：蛋白表达
片段类型：ORF
片段物种：空载体
原核抗性：Kan
真核抗性：
荧光标记：
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文献和实验(１）用适当的限制酶消化质粒和外源ＤＮＡ。如有必要，可用凝胶电泳分离片段并（或）用碱性磷酸酶处理质粒ＤＮＡ。通过酚：氯仿抽提和乙沉淀来纯化ＤＮＡ，然后用TE(pH7.6)溶液使其浓度为100/ml。 (２）按如下所述设立连接反应混合物： a．将0.1μl载体ＤＮＡ转移到无菌微量离心管中，加等摩尔量的外源ＤＮＡ。 b．加水至7.5μl，于45℃加温５分钟以使重新退炎的粘端解链，将混合物冷却到０℃。 c．加入：10xT4噬菌体ＤＮＡ连接酶缓冲液 １μl Ｔ４噬菌体ＮＤＡ
连接反应 （一）外源ＤＮＡ和质粒载体的连接反应 外源ＤＮＡ片段和线状质粒载体的连接，也就是在双链ＤＮＡ５'磷酸和相邻的3'羟基之间 形成的新的共价链。如质粒载体的两条链都带5'磷酸，可生成４个新的磷酸二酯链。但如果质粒ＤＮＡ已去磷酸化，则吸能形成２个新的磷酸二酯链。在这种情况下产生的两个杂交体分子带有２个单链切口，当杂本导入感受态细胞后可被修复。相邻的５'磷酸和３'羟基间磷酸二酯键的形成可在体外由两种不同的ＤＮＡ连接
片段2 [60fmol (~10ng)]C和F载体1 （60fmol）和外源插入片段3 （60fmol）D线状载体（5’-磷酸化）（60fmol）G环状载体[60fmol (~10ng)]1 载体DNA 已进行去磷酸化2 外源目的DNA 可以连接接头。3 连接反应中，质粒载体和插入的DNA 片段摩尔比一般为1：1。DNA 的总浓度应约为10ng/μl。（1）A、B和C管中加入：10×连接缓冲液 1.0μlT4噬菌体连接酶 0.5 Weiss单位5 mmol/L ATP
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