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- KEMOBio
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- KM102341
- 2025年07月12日
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- 技术资料
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-80℃
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90天
- 英文名：
pGL3-U6-sgRNA-PGK-Puromycin
- 库存：
100
- 供应商：
科淼生物
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0.5ug/0.5ug
| 规格： | 0.5ug | 产品价格： | ￥680.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 0.5ug | 产品价格： | ￥1280.0 |
英文名称：pGL3-U6-sgRNA-PGK-Puromycin
货号：KM102341
图谱：微客服
宿主：哺乳细胞
用途：基因敲除
片段类型：CRISPR,sgRNA
片段物种：空载体
原核抗性：Amp
真核抗性：Puro
荧光标记：Fluc
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文献和实验CRISPR-Cas9 全程实操教程：从 gRNA 设计到挑单克隆全程指导
的原件与表达 Cas9 的原件相连接，得到可以同时表达两者的质粒，将其转染细胞，便能够对目的基因进行基因操作，在 PAM (5'-NGG) 上游～3bp 进行切割，如下图所示。因此本实验的关键步骤是设计一对 20bp（不包括 NGG 在内的）完全互补的 oligo 插入到如上图所示的 filler。另 U6 启动子需要 5' 端的 G 起始转录，因此若设计的 oligo 第一个碱基非 G，需额外增加一个 G。操作详细流程1. 设计 sgRNA关于 sgRNA 的设计我们有专门开过一篇文章《一文掌握
vectors, which enables the co-expression ofSpCas9 protein driven by the potent constitutive promoterCBh and sgRNA driven by the RNA Pol III human U6 promoterin mammalian cells (Fig. 3 ). CBh promoter is a hybridpromoter derived from the CAG promoter
9 的细胞上使用只带 gRNA 的病毒，结果完全没有编辑，却误以为是靶点问题。下单前务必确认宿主细胞是否表达 Cas9，以及表达是否有功能（做过阳性对照验证）。 --- 二、六个选型维度逐个看 1. 筛选标记 抗生素抗性（puromycin、blasticidin、hygromycin）：可富集被感染细胞，是稳转株构建的标配。要注意细胞对药物的敏感性需预先测定（做杀伤曲线），不同细胞系的耐受浓度差异很大。 荧光蛋白（GFP、mCherry）：便于流式分选和感染效率可视化，适合不能加药筛的场景
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