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-80℃
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90天
- 英文名:
pET-37b(低拷贝)
- 库存:
100
- 供应商:
科淼生物
- 规格:
0.5ug/0.5ug
| 规格: | 0.5ug | 产品价格: | ¥680.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 0.5ug | 产品价格: | ¥1280.0 |
英文名称:pET-37b(低拷贝)
货号:KM101248
图谱:微客服
宿主:大肠杆菌
用途:蛋白表达,分泌表达
片段类型:ORF
片段物种:空载体
原核抗性:Kan
真核抗性:
荧光标记:
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文献和实验(1)用适当的限制酶消化质粒和外源DNA。如有必要,可用凝胶电泳分离片段并(或)用碱性磷酸酶处理质粒DNA。通过酚:氯仿抽提和乙沉淀来纯化DNA,然后用TE(pH7.6)溶液使其浓度为100/ml。 (2)按如下所述设立连接反应混合物: a.将0.1μl载体DNA转移到无菌微量离心管中,加等摩尔量的外源DNA。 b.加水至7.5μl,于45℃加温5分钟以使重新退炎的粘端解链,将混合物冷却到0℃。 c.加入:10xT4噬菌体DNA连接酶缓冲液 1μl T4噬菌体NDA
℃。 另外,再设立两个对照反应,其中含有(1)只有质粒载体;(2)只有外源DNA片段。如果外源DNA量不足,每个连接反应可用50-100ng质粒DNA,并尽可能多加外源DNA,同时保持连接反应体积不超过10μl。可用至少3种不同方法来测定T4噬菌体DNA连接酶的活性。大多数制造厂商(除New England Biolabs公司外)现在都用Weiss等,11968)对该酶进行标化。1个Weiss单位是指在37℃下20分钏内催化1mmol32P从焦磷酸根置换到[γ,β-32P]ATP所需酶时
是DNA长度,以cm计,b是随机卷曲的DNA区段的长度。b的值以缓冲液的离子强度为转移,而后者可影响DNA的刚度。 i是溶液中所有互补末端的深度的测量值,对于具有自身互补粘端的双链dna而言,i=2NoMx10-3末端/ml这里No是阿佛伽德罗常数,M是DNA的摩尔浓度(单位:mol/L)。理论上,当j=i时,给定DNA分子的一个末端与同一分子的另一末端,以及与不同分子的末端相接触的可能性相等。因而在这样的条件下,在反应的初始阶段中,环状分子与多联体分子的生成速率相等。而当j>i时,有利
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