- ￥8800
- 爱必信(absin)
- 上海
- abs60554
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件：
试剂盒应在-20℃条件下保存，有效期为 12 个月。开封后未使用完的试剂盒注意仍在规定储存条件下保存。
- 保质期：
试剂盒应在-20℃条件下保存，有效期为 12 个月。开封后未使用完的试剂盒注意仍在规定储存条件下保存。
- 英文名：
-
- 库存：
现货
- 供应商：
爱必信(上海)生物科技有限公司
- CAS号：
-
- 规格：
100T
| 概述 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 描述 | Vero细胞是世界卫生组织（WHO）和《中国药典》认可的疫苗生产细胞系，现已被用作人类疫苗的生产基质。生物制品尤其是疫苗类产品，在生产过程中容易产生Vero宿主DNA的残留，鉴于宿主残留DNA具有传递外源DNA等潜在危害，所以宿主细胞残留DNA作为生物制品安全性评价的一个重要指标，各国药品监督管理机构对其残留量有着严格的限度控制。 Vero残留DNA（qPCR）检测试剂盒能快速、特异地检测生物制品中成品，半成品和中间品中DNA残留量。 建议所有使用该试剂盒的实验室按需可做以下验证：标准品线性、 样本线性、 准确度（加标回收率）、定量限、精密度(重复性)、 分析特异性以及阴性参考品符合率。 样本线性：依据 YY/T 1182-2020 的相关要求，在线性范围内，取接近线性范围上限的高值样本按一定比例（如 5 倍或 10 倍）稀释为至少 5 种浓度，其中低值浓度样本须接近线性范围的下限，将每一浓度样本检测 1 次或多次，计算每一浓度的对数均值和稀释比例(或理论浓度)的对数值，以浓度的对数均值为 Y，稀释比例(或理论浓度)的对数值为 X 进行线性拟合，计算其线性相关系数 r。 分析特异性验证：验证需避免工艺杂质对检测结果的干扰，必要时可对样本进行核酸提取纯化。为避免基质干扰和保证检测有效性建议使用纯度较高的 DNA 进行相应稀释后来做验证。 精密度/定量限：验证时，如需同时配制标曲，需控制 CV，避免重复操作过多，CV 偏大影响标曲建立和精密度/定量限验证。 数据分析：由于仪器不同，数据阈值线会存在区别，故在数据分析时需依据实际情况统一阈值线再进行数据分析比较。 样本核酸提取纯化：可与“宿主细胞残留 DNA（磁珠法）样本前处理试剂盒”配合使用。该试剂盒主要用于生物制品样本中微量核酸的提取，可精准抽提各种生物制品中宿主细胞残留 DNA，适 用于多种基质缓冲溶液，可有效提取纯化微量的 DNA。 产品特点： 检测范围：适用对象广泛，灵敏度高 精确可靠：-5%＜相对偏差<5%，低浓度重复性CV值<20%；中高浓度重复性CV值<15% 快速便捷：qPCR 一小时即可出结果 产品性能指标： 线性范围：300pg/µL~0.003pg/µL。 标准品线性：R2≥0.980，扩增效率 90%≤Eff（%）≤110%，各浓度检测值 CV<15%。 准确度（加标回收率）：70%—130%。 定量限：0.003pg/µL，CV≤20%，测量偏差不大于|±20%|。 精密度(重复性)：高、中两个浓度参考品各 10次，变异系数CV<15%。 分析特异性：考察生物制品生产中常用的 DNA 对检测试剂盒的干扰，干扰组应与对照组重合，未见干扰。 阴性参考品符合率：NTC 为 Undetermined 或 Ct 值>35。 适用机型（包括但不限于）：ABI QuantStudio 3，ABI 7500，Bio-Rad CFX Opus96 等。 冻融稳定性：5 次以上。 |
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| 检验原理 | 依据《美国药典》<509>通则和<1130>以及《中国药典》通则<3407> 中的各种检测方法，最终选择更准确、可靠、科学的荧光探针（TaqMan ®）qPCR 法作为细胞残留 DNA 检测的方法。TaqMan ®荧光探针是一种寡核苷酸探针，其 5’末端携带荧光基团（报告基团），如 FAM、TET、VIC等，3’端携带淬灭基团，如 TAMRA、BHQ1 等。PCR 扩增时在加入一对引物的同时加入一条特异性的荧光探针，探针完整时，荧光基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收。PCR 扩增时，Taq 酶的 5'－3'外切酶活性将探针酶切降解，使荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统（荧光定量 PCR 仪）可接收到荧光信号，即每扩增一条 DNA 链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与 PCR 产物形成完全同步。该方法具有特异性强、灵敏度高等特点，在目前生物制药细胞核酸残留检测中被广泛使用。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 产品组成 |
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| 用途说明 | Vero 残留 DNA（qPCR）检测试剂盒专一性强，灵敏度高，采用 qPCR 法定量检测生物制品中半成品、中间品、原液以及成品中 Vero 细胞的 DNA 残留量。试剂盒的线性范围为300pg/µL~0.003pg/µL。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 使用方法 | 一、准备工作： 1、试剂盒准备： 将试剂盒各组分置于冰上或 4℃，确保充分溶解后开始操作。 2、需自备的耗材及设备： （1）荧光定量 PCR 仪、涡旋仪、离心机 （2）高精度移液器及一次性无菌无酶低吸附带滤芯吸头（0.5-10µL、10-100µL、20-200µL、100-1000µL） （3）1.5mL 无菌无酶低吸附离心管 （4）无菌无酶八联管或 96 孔 qPCR 板 二、操作流程： 1、操作详细步骤： （1）qPCR 反应液的制备： ①根据所需检测的参考品和待测样品数量（一般做 3 组复孔），分别计算反应所需孔数： 反应孔数=（参考品 ST1-6+1 个无模板对照 NTC+待测样品）×3 ②根据反应孔数计算本次所需的 qPCR MIX 总量： qPCR MIX =（反应孔数+2 或 3）×15μL（2×qPCR Reaction MIX）+ （反应孔数+2 或 3）×5μL（Vero Primer&Probe MIX）（2 或 3 为操作损失量） ③将所用试剂置于冰上完全溶解，轻微振荡混匀，瞬时离心，按下表所示配制： 表 2 qPCR MIX 配制表
④将配制的 qPCR MIX，轻微振荡混匀，瞬时离心，按 20μL/孔分装至八联管或者 96 孔板中。 ⑤将DNA稀释液按10μL/孔加到分装了 qPCR MIX 八联管或者 96 孔板中，具体加样见表 4。 （2）定量参考品的稀释： （注：根据试剂盒提供的标准品按照需求配制） 用试剂盒提供的 DNA 稀释液将 DNA 定量参考品（30ng/μL）系列倍比（稀释倍数：10 倍）稀释，稀释浓度依次为 3000 pg/μL，300 pg/μL，30 pg/μL，3 pg/μL，0.3 pg/μL，0.03 pg/μL，0.003 pg/μL。 具体步骤如下： ①将试剂盒中的 DNA 定量参考品和 DNA 稀释液置于冰上或 2-8℃条件下融化。待完全溶解后，轻微振荡混匀，离心 3~5 s。 ②取干净的 1.5 mL 离心管，分别标记为 ST0，ST1，ST2，ST3，ST4，ST5，ST6。 ③在 ST0 管中用 DNA 稀释液将 DNA 定量参考品（30ng/μL）稀释至 3000 pg/μL，轻微振荡混匀，离心 3~5 s。确保 DNA 定量参考品与DNA 稀释液充分混匀，使用时避免反复冻融。 ④在 ST1，ST2，ST3，ST4，ST5，ST6 管中分别加入 90μL DNA 稀释液，再进行梯度稀释，稀释方法如下所示： 表 3 DNA 定量参考品的稀释
 【注】：标准曲线浓度点可根据实际验证结果进行选择，应至少包含 5 个浓度点。
①Experiment name：修改实验名称。 3) 在 Plate Setup 4) 设 置 反 应 程 序 ：
三、结果分析： 2、结果分析的参数设置需依据具体的机型及使用的软件版本，一般也可由仪器自动判读。 |
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| 性能 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 储存/保存方法 | 试剂盒应在-20℃条件下保存，有效期为 12 个月。开封后未使用完的试剂盒注意仍在规定储存条件下保存。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 注意事项 | 1、本试剂盒已通过稳定性（冻融等因素）的验证，无需分装。 2、阴性样品（2×qPCR Reaction MIX、Primer&Probe MIX 和 DNA稀释液等）和阳性样品（参考品和待测样品等）的配制和加样环境需区分区域，不可在一个区域内操作，配制人员需穿戴整齐，戴好口罩、手套和穿好洁净服。 3、注意在不同加样步骤间及时更换吸头，避免交叉污染，避免长时开盖，使用移液器移液时，需避免液体挂壁。 4、试剂盒必须在有效期内使用，每次实验均需重新制备相应的标准曲线，不建议不同标准曲线之间混用，不建议不同批次的相关试剂混用。 5、试剂盒内所有组分建议在低温环境融化后使用，且需确保其充分溶解，各组分使用前需充分混匀，以保证试剂的均一性，经混匀的试剂需经短暂离心，以使管壁及盖子上的液体全部集中于管底。若发现DNA 稀释液中有析出物，建议于 37 ℃条件下进行孵育，使 DNA 稀释液完全溶解。 6、只有严格遵守说明书的操作方法，全部使用本试剂盒配套的试剂才能保证最佳检测效果。 7、最终的试验结果与试剂的有效性、操作者的操作方法及试验环境密切相关。 8、公司只对试剂盒本身负责，不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责，请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量，预留充足的样本。 |
①界面，点击
②创建探针，在TargetName中编辑探针名称并命名，在Reporter③和Quencher④中选择所需的荧光基团和淬灭基团。本产品荧光基团选择FAM，淬灭基团为None，参比荧光为ROX。点击
⑤创建样品，在相应的Samplename⑥一栏中命名样品的名称。
①界面，将标准曲线孔在 Task② 一栏设置为“S”③，并且在 Quantity④一栏分别赋值设为 300，30，3，0.3，0.03（单位为 pg/μL），并且在相应的 Sample name 一栏中命名为ST1，ST2，ST3，ST4，ST5。在 Plate Setup
①界面中，将无模板对照 NTC 孔在 Task②一栏设置为“N”⑤，将待测样本孔在Task②一栏设置为“U”⑥，并且在相应的 Sample name 一栏中命名样品的名称。（图例仅供参考）
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