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- 上海
- 2025年07月14日
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爱必信(上海)生物科技有限公司
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- 应用：
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- 检测方法：
间接竞争ELISA方法
- 检测范围：
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- 规格：
96T
| 概述 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 描述 | 卡那霉素是氨基糖甙类抗生素，应用于动物疾病的治疗、菌株筛选以及细胞和基因治疗药物原料制备中，由于其具有神经毒性和肾脏毒性，损害第8对脑神经，导致前庭和耳蜗损伤。在动物食品、生物药品中的残留会影响人类健康，甚至引起过敏反应。欧美国家及我国均要求其限量使用。 卡那霉素定量检测试剂盒采用间接竞争ELISA方法，微孔条上预包被的偶联卡那霉素抗原与样品中残留的卡那霉素竞争结合酶标记的抗卡那霉素单克隆抗体，之后加入酶标二抗，再通过加入TMB底物显色，使用酶标仪检测吸光值，吸光值与样品中卡那霉素的含量成负相关。本试剂盒操作时间仅需一小时左右，线性范围为0.05ng/mL-5ng/mL。在做卡那霉素原料线性验证时，建议将卡那霉素原料稀释到试剂盒线性范围内再进行测定，按照一定比例稀释为至少 5 个浓度，检测浓度与稀释倍数呈线性相关。 专属性应针对工艺中存在的其他物质进行相关验证。建议釆用高浓度与低浓度质控样品，加入递增浓度的相关干扰物质进行特异性考察。未加入分析物的基质也应同时被测量。质控品的准确度应在一定范围内，且未加入分析物的基质的测量值应低于定量下限。 产品特点： 特异性强：与青霉素、硫酸链霉素、庆大霉素、氨苄无交叉反应 灵敏度高：试剂盒灵敏度为0.05ng/mL 便捷高效：使用两步法，只需1小时左右即可出结果 性能优秀：标曲线性好，准确度高，重复性好 产品性能指标 ： 检测限：＜0.05 ng/mL 定量限：0.05 ng/mL 线性范围：0.05-5 ng/mL 准确度（加标回收率）：70%-130% 准确度（测量偏差）：≤15% 重复性（批内差）：≤15% 特异性：
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| 检验原理 | 本试剂盒采用间接竞争 ELISA 方法测定样品中卡那霉素的微量残 留。酶标板上预包被偶联抗原，样本中残留的卡那霉素和微孔条上预包 被的偶联抗原竞争抗卡那霉素抗体，加入酶标二抗，之后通过加入 TMB 底物显色，使用酶标仪在 450nm/630nm 波长下测定吸光度（OD 值）， 并计算百分吸光度，样品中卡那霉素的浓度与百分吸光度成负相关。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 产品组成 |
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| 使用方法 | 一、准备工作 1、试剂盒准备 将试剂盒各组份放置室温平衡 30min 后开始操作。 2、需要自备的耗材及设备 1）酶标仪、恒温振荡器（或恒温培养箱）、洗板机、漩涡振荡器、计时器； 2）高精度移液器及一次性吸头（0.5-10µL、10-100µL、30-300µL、100-1000µL）； 3）去离子水（用于配制洗液（1×））； 4）吸水纸、EP 管、一次性手套； 3、试剂准备 1）洗液（1×）配制 取洗液（20×）1 份，加 19 份去离子水配制成工作浓度洗液（1×）。洗液（20×）中如果有结晶形成，应置于室温或 37℃水浴轻轻摇晃，待结晶完全溶解后再进行稀释。未用完的洗液（20×）应置于 2-8℃储存。 2）显色液的配制 将显色液 A、显色液 B 等体积混合，混匀后避光放置。（注意：时间不能放置太久，一般使用前 10min 配制。如混合后的显色液已经变蓝，请勿使用）。 3）标准品的制备 用样品稀释液将标准品稀释至 5ng/mL，然后用 2.5 倍倍比稀释的方法配制标准品（每次实验使用新配制的标准溶液），如下图：  4、样品准备 将样本恢复至室温，加样前混匀样本；用户如需稀释样品或盒中配套的高浓度标准品，可使用盒中样品稀释液进行稀释；如是细胞类样本，建议检测前按 3000rpm/min 转速，离心 5min，取上清进行检测。 二、操作流程 1、操作简图  2、操作详细步骤 （1）将试剂盒各组份恢复室温 30min，从已平衡至室温的铝箔袋中取出试验所需酶标板条，用记号笔标记板条顺序（建议进行复孔测定），剩余板条用封板膜封板后重新放回铝箔袋中，封好，置于 2-8℃保存。（注意：在后续拍板过程中板条容易脱落，注意做好标记） （2）样品温育：每孔中加入 50µL 标准品/空白（样品稀释液）/样品，之后加入 50µL 抗体工作液，用封板膜封板，然后置于 25℃避光静置温育 30min。（注意：必须先加标准品，如果先加抗体会直接和板上抗原反应；温育过程中如果不封板或者封板不完全，会导致反应液蒸发，导致实验出现误差；所有孵育过程中要尽量避免光线照射） （3）洗板：温育完成后，小心揭去封板膜，弃去孔中液体，用洗液（1×）洗板 3 次（250µL/孔），拍干样品孔中的残留液体。（注意：如采用手洗板，加洗液（1×）时需要悬空加液，枪头最好不要碰到孔内壁；每次加入洗液（1×）后静置 30s 并轻微震荡；拍干时注意每次换新的吸水纸或在纸上干净的区域拍干） （4）酶标二抗温育：每孔加入酶标二抗，100µL/孔，用封板膜封板，然后置于 25℃避光静置温育 30min。 （5）洗板：方法同步骤 （3）。 （6）显色：将预先配置好的显色液按 100µL/孔加入酶标板中，用封板膜封板，25℃避光静置温育 15min。 （7）终止：加入终止液，100µL/孔，显色均匀后即可读数。（注意：建议在酶标仪读数程序中设置 5-10s 的震荡） （8）读数：将酶标板放入酶标仪中，设置波长为双波长 450/630nm，读取吸光度值，测定应在终止后 20min 内完成。 三、数据处理 1、吸光度值的计算 每个标准品或样品的吸光度值为OD450nm-OD630nm。 2、百分吸光度的计算 每个标准品或样本的平均吸光度值（双孔）除以0ng/mL标准品的平均吸光度值再乘以100%，即为百分吸光度： 百分吸光度（%）＝B/B0×100% B：标准品或样本的平均吸光度值 B0：0ng/mL标准品的平均吸光度值 3、标准曲线的绘制与计算 以标准品百分吸光度值为纵坐标Y，标准品浓度值为横坐标X，绘制标准曲线，推荐使用四参数Logistic数学模型拟合方程： Y=((A-D)/(1+(X/C)^B))+D 将样本的百分吸光度值代入标准曲线中，读出样本所对应的浓度值，乘以其对应的稀释倍数即为样本中卡那霉素的实际浓度。  |
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| 性能 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 储存/保存方法 | 试剂盒应在 2-8℃条件下避光保存，有效期为 12 个月。开封后未使用完的试剂盒注意仍在 2-8℃条件下避光保存。 |
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| 注意事项 | 1、该试剂盒的最佳反应温度为 25℃，温度过高或者过低将导致检测吸光值和灵敏度发生变化。 2.、试剂盒内所有组分都必须恢复至室温（20-25℃）后方可使用。 3、所有组分使用前充分混匀，标准品还需短暂离心 5 秒，将管壁及盖子上的液体全部集中于管底；使用后立即将所有试剂放回 2-8℃。 4、试剂盒必须在有效期内使用，每次试验均需制备相应的标准曲线，不建议不同批次的相关试剂混批使用。 5、酶标板加液时注意不要触碰到微孔板底部，防止破坏包被层。不同样本和步骤间及时更换加样槽和吸头，避免交叉污染。 6、板条洗涤后拍干时，注意防止板条脱落，封板膜注意不能重复使用。 7、显色时高浓度可能会产生黑色絮状物，属于正常现象，程度轻微不影响最终读数结果。 8、读数时注意核对检测波长及拟合方程选择是否正确。 9、只有严格遵守说明书的操作方法，全部使用本试剂盒配套的试剂才能保证最佳检测效果。 10、检测结果的不同可由多种因素引起，包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗板技术、反应时间或温度、试剂盒的储存等。 11、本公司只对试剂盒本身负责，不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责，请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量，预留充足的样本。 12、本试剂盒内终止液为酸溶液，操作时应格外注意。 13、操作者应穿戴个人防护设备，如实验服、手套、口罩和护目镜。 |
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