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888
Protein A
12个月
天德
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96Test
此蛋白A检测ELISA试剂盒用来定量检测重组耐碱性等非天然的蛋白A,只能用于科研和生产,不能应用于人或动物疾病的诊断治疗。本试剂盒提供一个样品的酸化处理方法,把蛋白A从IgG产品中分离出来,在人源化单抗浓度高达2mg/mL的情况下,蛋白A的检测限低至78pg/mL以下。
此试剂盒采用标记生物素系统的双抗夹心的技术方法。酶标板预包被蛋白A的特异性单克隆抗体,含有蛋白A的样品使用样品稀释液进行稀释,然后酸化液混合使蛋白A从抗体产品中的分离出来,样品和预包被在酶标板上的蛋白A捕获抗体反应。再加入生物素标记的检测抗体反应形成夹心三明治复合物。然后洗涤去除没有参与反应的物质,加入亲和素标记的HRP,短暂孵育后,进行TMB显色,然后加入终止液终止显色反应,在450nm处检测吸光值,OD值和样品含量成正比关系。
Component | Product # | Storage |
1. Protein A Standard(proteinA蛋白标准品) Recombinant Alkali-tolerant Protein A in a protein matrix with preservative, 50μg/mL, 1x0.1mL |
Bk031 | 2-8°C |
2. Biotinylated Antibody(生物素标记的抗体) Biotinylated anti-protein A monoclonal antibody in a protein matrix with preservative, 1x13mL |
Bk016 | 2-8℃ |
3. Sample Diluent (样品稀释液) Tris buffered saline with a protein matrix and preservative, 1x30mL |
Bk017 | 2-8℃ |
4. Denaturing Buffer (酸化缓冲液) Citrate buffer with detergent and preservative, 1x20mL |
Bk018 | 2-8℃ |
5. 10x Assay Buffer (10x)洗涤缓冲液 phosphate buffer with preservative, 1x30mL |
Bk004 | 2-8℃ |
6. Streptavidin labeled HRP 亲和素标记的HRP Streptavidin labeled HRP in a protein matrix with preservative, 1x13mL |
Bk019 | 2-8℃ |
7. TMB Substrate (TMB显色液) 3,3’,5,5’Tetramethylbenzidine, 1x13mL |
Bk007 | 2-8℃ |
8. Stop Solution (终止液) 2M sulphuric acid, 1x13mL |
Bk008 | 2-8℃ |
9.Monoclonal anti-Protein A Coated plate of 96 wells(包被proteinA抗体的96孔酶标板) 12x8 well strips in a bag with desiccant |
Bk032 | 2-8℃ |
8个离心管标记1#-8#,取990μL样品稀释液加入到1#和2#管中,取500μL样品稀释液加入到3#-8#管中。再取10μL样品标准品加入到1#管中,涡旋混匀后取10μL再加入到2#管中涡旋混匀。然后取2#管500μL液体加入到3#管中涡旋混匀,再取3#管500μL液体至4#管中涡旋混匀,如此直至8#管。
稀释完全之后 ,2#-8#离心管中protein A标准品的浓度分别为5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.156、0.078ng/mL。另外标记一管为0ng/mL,加入样品稀释液。
标准品和样品准备好之后就进入样品处理程序。
数据处理和结果分析:
利用软件(如Curve Expert或ELISA Calc)通过标准品浓度梯度来建立检测标准曲线,把OD值和标准品浓度的对应关系用4参数逻辑拟合或三次多项式线性拟合成标准曲线,然后把检测样品的OD值带入相应曲线方程计算出对应的样品浓度。
典型的标准品检测数据和曲线拟合:
标准品浓度(ng/mL) | 平行孔OD | 平均值 | 除零OD值 | |
5 | 2.085 | 2.096 | 2.0905 | 2.063 |
2.5 | 1.294 | 1.272 | 1.283 | 1.2555 |
1.25 | 0.737 | 0.743 | 0.74 | 0.7125 |
0.625 | 0.43 | 0.436 | 0.433 | 0.4055 |
0.3125 | 0.227 | 0.214 | 0.2205 | 0.193 |
0.156 | 0.142 | 0.128 | 0.135 | 0.1075 |
0.078 | 0.088 | 0.079 | 0.0835 | 0.056 |
0 | 0.027 | 0.028 | 0.0275 | - |
分析方法指标:
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