- ￥3490
- gelatins
- JC-E4328
- 国内
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
禽呼肠孤病毒RT-PCR试剂盒
- 保质期：
6个月
- 供应商：
上海机纯实业有限公司
- 保存条件：
避光/低温保存
- 规格：
50次
产品及特点：
禽呼肠孤病毒(Avian Reovirus，ARV) 会引起禽呼肠孤病毒感染，是鸡的一种传染性疾病，可引起鸡多种疾病，包括病毒性关节炎、矮小综合征、呼吸道疾病、肠道疾病和所谓吸收不良综合征。急性感染时，可见跛行，有些鸡发育不良。慢性感染跛行更显著，有一小部分病鸡的踝关节不能活动。有时可能看不到关节炎/腱鞘炎的临诊症状，但在屠宰时可见趾屈肌腱区域肿大。这样的鸡群增重慢，饲料转换率低，总死亡率高，屠宰废弃率高，属于不明显感染，因此灵敏快捷的诊断产品具有重要的意义。本产品基于 PCR 原理开发。
1. 一站式，用户不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。
2. 根据禽呼肠孤病毒的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。
3. 灵敏度可以达到1000拷贝/反应。
4. 使用一管式 RT-PCR 技术，RT 和 PCR 两步在一个试管内完成，不需要中间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。
5. 本产品足够50次20μL体系的RT-PCR。
6. 本产品由江蓝纯生物提供，不得用于临床诊断。
规格及成分：
| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 | 5×双酶一管式 RT-PCR Buffer | 200 μL（橘黄盖） |
| 试剂二 | MMLV-Taq Mix | 75 μL（红盖) |
| 试剂三 | 超纯水 | 1 mL（亮黄盖） |
| 试剂四 | 禽呼肠孤病毒RT-PCR 引物混合液 | 100 μL（白盖） |
| 试剂五 | 禽呼肠孤病毒RT-PCR阳性对照（1×10E8 /μL） | 50 μL（黄盖） |
| 试剂六 | 使用手册 | 1 份 |
运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。
自备试剂：
样品 RNA。
禽呼肠孤病毒RT-PCR试剂盒
使用方法：
一、样品 RNA 的制备：
1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL禽呼肠孤病毒PCR阳性对照的 1000 倍稀释液作为制备的阳性对照。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。
2. 用自选方法纯化N+2个样品的RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。可以选购本公司的柱式病毒RNAout。
二、设置 RT-PCR 反应（20μL 体系）：
3.如果有N+2个样品，则标记N+4个PCR管（额外增加的两个管一个是RT-PCR阳
性对照，另一个是RT-PCR 阴性对照）并按照下表在PCR管中加入下列成分：
| 成份 | N+2 个 样品管 |
RT-PCR 阴性对照 |
RT-PCR 阳性对照 |
| 5×双酶一管式RT-PCR Buffer | 各 4 μL | 4 μL | 4 μL |
| 禽呼肠孤病毒RT-PCR引物混合液 | 各 2 μL | 2μL | 2μL |
| N+2个制备的 RNA 样品 | 各 12.5μL | -- | -- |
| 超纯水 | -- | 12.5μL | -- |
| 禽呼肠孤病毒RT-PCR阳性对照的1000倍稀释液 | -- | -- | 12.5μL |
| MMLV-Taq Mix | 1.5 μL | 1.5 μL | 1.5 μL |
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 逆转录 | 42℃ | 30 min |
| 预变性 | 95℃ | 5 min |
| PCR反应(35个循环） | 95℃ | 30 sec |
| 58℃ | 30 sec | |
| 72℃ | 20 sec | |
| 延伸 | 72℃ | 7 min |
5. 琼脂糖电泳检测扩增效果。如果阴性对照有扩增产物或阳性对照无扩增产物，则说明实验失败，需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有扩增产物、阳性对照必须有预期条带出现，才有必要分析样品的实验结果，如果有预期片段大小的扩增产物则为阳性，如果无则为阴性。
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文献和实验人：郭元吉、王敏，联系电话：010-63534632，010-63581337，传真：（010）63534632。 五、标本检测方法 1．禽H5 病毒核酸检测 材料：疑似禽流感患者的咽、鼻拭子或含漱液，死亡病例的尸检肺组织、气管分泌物。 方法： RT-PCR，用于禽H5 亚型流感病毒的快速检测、测序及排除工作 试剂：特异性H5 及甲型流感病毒的引物、病毒RNA 提取试剂盒、逆转录酶、Taq DNA 聚合酶等试剂, 建议使用德国QIAGEN 的Rneasy Mini Kit (病毒
的5'和3’末端的有效方法，以其简单、快速、廉价等优势而受到越来越多的重视。经典的RACE技术是由Frohman等(1988)发明的一项技术，主要通过RT-PCR技术由已知部分cDNA序列来得到完整的cDNA5’和3’端，包括单边PCR和锚定PCR。该技术提出以来经过不断发展和完善，克服了早期技术步骤多、时间长、特异性差的缺点(Frohman等,1995:Schaefer,l995: Chen,1998: Bespalova等,1998: Matz等11999)。对传统RACE技术的改进主要是引物设计及RT-PCR
主要内容 RT-PCR原理 RT-PCR步骤 常见问题分析 两步法RT-PCR 一步法RT-PCR 两步法与一步法RT-PCR比较 RT-PCR主要用途 分析基因的转录水平获取目的基因合成cDNA探针 逆转录酶的选择 AMV：禽成髓细胞瘤病毒，逆转录酶和 RNA 酶H活性。最适42℃，最新版本可达60 ℃ （Bioflux公司）。MMLV
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