Q0050 麦格 Western及IP细胞裂解液

免疫沉淀原理

量的抗体，同时对免疫沉淀体系也需要有严格的控制指标。免疫沉淀实验从：蛋白样品处理；抗体-agarose beads孵育；抗体-agarose beads复合物洗涤到最后的鉴定，每步都非常关键，需要严格控制实验流程中每个关键步骤的质量，才能最终达到你的实验目的。 IP实验步骤 基本实验步骤 1. 收获细胞，加入适量细胞IP裂解缓冲液（含蛋白酶抑制剂），冰上或者4℃裂解30 min， 12 000g离心30 min后取上清； 2. 取少量裂解液以备Western blot分析，剩余

基因递送的多面手：慢病毒载体

PHIs 诱导心肌细胞中的钙释放。 PHD2 在心肌细胞中激活肌浆网通道辅助蛋白 CaMKⅡ。用 shRNA 干扰技术敲低心肌细胞中 PHD2，Western blot 证实了 PHD2 的沉默。与对照细胞相比，沉默 PHD2 显著增加了 CaMKⅡ的磷酸化。 Ca2+在心肌细胞中介导 PHI 刺激引起的 AMPK 激活。肌浆网通道抑制剂瑞安诺丁显著降低了 PHI 处理诱导的与 Ca2+相关的荧光强度。慢病毒介导的 RyR2 特异性 shRNA 显著降低了 RyR2 在 mRNA 水平上的表达

【求助】胰酶和血清是否影响p-akt表达？

olivial 最近想用western blot检测小胶质细胞活化后细胞内p-Akt表达情况（包括时间点），那么提蛋白时可否用胰酶消化的方法？加药前是否要将完全培养液换成无血清培养液？ ylhuang0502 Q1. 提蛋白时可否的方法？ A1.: 不要用胰酶消化， 贴壁细胞处理后，立刻至于冰上，用PBS洗三次后，直接加lysis buffer裂解提蛋白，lysis buffer的组分可查查文献，或在本版搜一下。