Western及IP细胞裂解液
产品编号
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产品名称
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包装
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WB0105
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Western及IP细胞裂解液
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100ml
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产品简介:
1. Western及IP细胞裂解液(Cell lysis buffer for Western and IP),是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。本细胞裂解液裂解的细胞,可以用于PAGE,Western,免疫沉淀(immunol precipitation,IP)和免疫共沉淀(co-IP)。
2. Western及IP细胞裂解液的主要成分为20mM Tris (pH7.5),150mM NaCl,1% Triton X-100,以及sodium pyrophosphate,β-glycerophosphate,EDTA,Na3VO4,leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白的降解,并维持原有的蛋白间相互作用。
3. 用Western及IP细胞裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用我们生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
Western及IP细胞裂解液使用方法:
对于培养细胞样品:
1. 取适当量的Western及IP细胞裂解液混匀,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
2. 对于贴壁细胞,去除培养液用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入适量裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。轻轻的摇晃约5-10分钟。充分裂解后,10000-14000g离心10分钟,取上清,即可进行后续操作。
裂解液用量说明: 用于不同规格标准培养板裂解液容量
板规格/表面积
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试剂容量
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100mm
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500-1000μι
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60mm
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250-500μι
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6-well plate
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200-400μιper well
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24-well plate
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100-200μιper well
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96-well plate
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50-100μιper well
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3. 对于悬浮细胞,离心收集细胞,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍.加入适量裂解液用枪吹打把细胞吹散。用手指轻弹或旋涡震荡5-10分钟以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装然后再裂解。充分裂解后,10000-14000g离心10分钟,取上清,即可进行后续操作。
Western及IP细胞裂解液 对于组织样品:
1.手术切除的组织块迅速置于预冷的生理盐水中,漂洗数次,以清洁表面的血迹,将组织称量后切成几个较小的组织块放入组织匀浆器中。
2. 取适当量的Western及IP细胞裂解液混匀,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
3. 按组织净重(g):裂解液(ml)=1:10的比例,加入相应体积的裂解液进行匀浆(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液 如果需要高浓度的蛋白样品 可以适当减少裂解液的用量) 。
4. 用玻璃匀浆器匀浆直至充分裂解。
5. 充分裂解后10000-14000g离心3- 5分钟取上清即可进行后续作。
注意事项:
1. 抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。建议将样品分装成合适的量,然后冷冻干燥或直接以液体状态置-20℃中保存,不要反复冻融。
2. 需自备PMSF。建议在临用前数分钟内加入PMSF使PMSF的最终浓度为1mM。PMSF(WB0114)可以向我公司订购。
3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
Western及IP细胞裂解液yb-7778R APC5细胞分裂周期蛋白5抗体 浓度1mg/ml
yb-0076R beta-Amyloid 1-42(CT)β淀粉样肽/Aβ42抗体 浓度1mg/ml
yb-8070R ADCK4ADCK4蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-7892R AIMP3抑癌蛋白AIMP3抗体 浓度1mg/ml
yb-7903R AKAP associated Sperm Protein精子相关蛋白AKAP抗体 浓度1mg/ml
yb-7904R AKAP6蛋白激酶A锚定蛋白6抗体 浓度1mg/ml
yb-7942R ABHD1肺α/β水解酶蛋白1抗体 浓度1mg/ml
yb-7943R ABHD13水解酶结构域蛋白13抗体 浓度1mg/ml
yb-7945R ABHD14B水解酶结构域蛋白14B抗体 浓度1mg/ml
yb-7946R ABHD15水解酶结构域蛋白15抗体 浓度1mg/ml
yb-7947R ABHD3肺α/β水解酶蛋白3抗体 浓度1mg/ml
yb-7941R ABCF3三磷酸腺苷结合盒转运蛋白F亚基3抗体 浓度1mg/ml
yb-7940R ABCA5三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A亚基5抗体 浓度1mg/ml
yb-7951R ADCK1ADCK1蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-7950R ACBD4酰基辅酶A结合结构域蛋白4抗体 浓度1mg/ml
yb-7948R ABHD4α/β水解酶4抗体 浓度1mg/ml
yb-7952R ADCK2ADCK2蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-7956R ALDH16A1乙醛脱氢酶16家庭A1抗体 浓度1mg/ml
yb-7959R AMIGO3粘附分子IgG样结构域蛋白3抗体 浓度1mg/ml
yb-7953R AKR1A1乙醇脱氢酶1抗体 浓度1mg/ml
yb-7954R ALADδ氨基乙酰丙酸脱水酶抗体 浓度1mg/ml
yb-7958R ALS2CR4肌萎缩侧索硬化症相关蛋白4抗体 浓度1mg/ml
yb-9505R alpha 2 Macroglobulinα2巨球蛋白(α-2M)抗体 浓度1mg/ml
yb-9062R ACCSLACCSL蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-4708R AFP甲胎蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-11058R Mint3β淀粉样前体蛋白结合蛋白3抗体 浓度1mg/ml
yb-11072R ASTN2星形肌动蛋白抗体 浓度1mg/ml