高效RIPA裂解液(组织/细胞)*麦格*Q0005-20mL

产品简介

英文名称RIPA buffer(high)

别名蛋白提取试剂盒

外观（性状）黄色澄清液体

储存条件附件PMSF-20℃，裂解液4℃。有效期1年

规格20ml 100ml 500ml

单位瓶

运输温度：常温运输

 

 

 

本品为高效组织细胞裂解液。主要用于从动物组织和动物细胞中抽取的可溶性蛋白。组织活细胞本产品配有一支PMSF（0.3ml/1.5ml），PMSF请于-20℃保存。

 

 

 

使用说明

 

如发现RIPA有沉淀，请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。

 

根据使用量，取每1ml RIPA 加入10ul PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。混匀备用 （PMSF现用现加）。

 

1、样品前处理：

 

a)对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。

 

b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞量加入 150-250 ul 裂解液的比例加入裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。

 

c)对于组织样品： 把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。 (如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。

 

用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

 

2、后处理：

 

将裂解后的样品10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

 

注意事项 ：

 

本试剂为强烈型裂解液，可以提取核蛋白，但在提取核蛋白的同时，也会将基因组一并释放出来，造成细胞裂解液粘稠，此时可以直接加入蛋白上样缓冲液，煮沸再离心，离心后直接上样电泳；若想测定浓度，可入加少量 SDS（1%），煮沸后离心测浓度。本系列蛋白提取试剂所提取的蛋白由于含有去污剂，所以不适合使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒，请选择BCA法或者Lowry法检测蛋白浓度。

 

如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散粘稠状物，随后离心取上清用于后续实验。

 

备注：

以上数据均来自公开文献, 暂未进行独立验证, 仅供参考。