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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
上海联祖
- 库存:
44
- 生长状态:
贴壁生长
- 是否是肿瘤细胞:
否
- 规格:
T25培养瓶
| 产品名称 | 规格 | 货号 |
| 大鼠腹腔主动脉外膜成纤维细胞 | T25瓶 | LZ-YX9977 |
含量:>1x10^6 细胞数
规格:T25瓶
用途:仅供科研使用。
干冰运输及复苏好存活细胞
(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
(2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
1) 收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
3) 悬浮细胞:T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟,弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中(加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基)。
4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代 。 一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。备注:该细胞为悬浮并部分聚团生长
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
二. 细胞处理:
1) 冻存细胞的复苏:
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
悬浮状态下生长的细胞,可以通过向培养瓶中添加完全培养基来维持细胞的生长状态,一般情况下细胞密度维持在1×105~1×10^6个/mL(不同细胞对密度要求不同,)可以维持细胞的正常生长。如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中1000rpm,离心5min,弃去上清,补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3) 细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
下面T25瓶为例;
1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10^6~1×107个活细胞/ml.
2. 1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ,按每1ml冻存液含1×10^6~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。
3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
| 人低分化肺腺癌细胞;SK-LU-1 | 中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-HCV-NS4A 间质细胞瘤细胞,MLTC-1细胞 CHSE细胞,鲑鱼胚胎细胞 |
| 人恶性多发性畸胎瘤细胞;ERA-2 人小梁网细胞完全培养基 100mL | RNA结合蛋白NOB1抗体 |
| CD274 Others Rat 大鼠 PD-L1 / B7-H1 / CD274 人细胞裂解液 (阳性对照) | 0脂酰丝氨酸脱羧酶PISD抗体 |
| 皮下脂肪细胞Many types of cells包装:5 × 105次方(1ml) | 果糖胺-3激酶抗体 |
| EL4 小鼠淋巴瘤细胞 | 细胞间粘附分子1抗体 |
| CM-M063小鼠肾小球内皮细胞完全培养基100mL | 蛋白赖氨酸-6-氧化酶抗体 |
| 人淋巴成纤维细胞cDNAHLF cDNA | 神经内分泌转化酶2抗体 |
| 少突胶质前体细胞分化培养基OPCDM-prf | 跨膜蛋白132A抗体 |
| SD大鼠骨髓间质干细胞 SD rat bone marrow mesenchymal stem cells | 阴离子交换蛋白2抗体 |
| 大鼠脑胶质瘤细胞;C6 | 半胺酸蛋白酶-10抗体 |
| 猪肾传代细胞;IBRS-2 | 脯氨酸水解酶4抗体 |
| COS-7细胞,非洲青猴肾细胞 人胚肾上皮细胞,HKC细胞 主动脉平滑肌细胞Many types of cells包装:5 × 105次方(1ml) | 基质金属蛋白酶-24抗体 |
| 大鼠腹腔主动脉外膜成纤维细胞SF767(人脑瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 | 锌指蛋白804A抗体 |
| SK-N-SH细胞,人神经上皮瘤细胞 环状芽孢杆菌 人前列腺上皮细胞RNAHPEpiC miRNA5 μg | 分支酶GBE1抗体 |
| 人胚胎胰腺组织来源细胞;CCC-HPE-2 | 酸性神经酰胺酶1抗体 |
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文献和实验于 4% 多聚甲醛内4度后固定 4-6 个钟头。 四、难点与关键点 将灌注针插入主动脉内是灌注固定的关键,也是难点。首先准确找到主动脉,这是此步骤的要点。可用温生理盐水将胸腔内的血液冲洗干净,用眼科镊子轻轻夹住心 外膜(夹的越少越好,以免影响取材)将心脏向左上方提起,即可看清主动脉,又可使灌注针很容易地插入主动脉内。 插入时动作要慢,针尖方向不要偏向右侧,以免刺入右心房,如果感到有阻力,则将针退后、调整方向重新进针,直到进入主动脉,灌注针进入主动脉后可在心脏的上方看到其位置,灌注针进入主动脉的长度
弓至肾动脉一段,两端结扎剪断,放入60℃预热无菌水中2秒。然后置于准备好的RPMi1640培养基(含双抗)中。 2、剪切:在超净台上,将血管置于培养皿中,用眼科镊小心剥离外膜面的结缔组织,并从根部剪去所有肋间动脉。无血清培养基冲洗数遍,去除残血后,将动脉转移至另一含少量培基的无菌培养皿中,用刀片将主动脉两末端切去,剩下的主动脉切成宽1~1.5mm的环。 3、接种:将动脉环竖直放入35mm培养皿(1%明胶4℃预置过夜,用前2h移入CO2培养箱,用前培养液冲洗)中。置CO2培养箱2h后,加入1.5ml
liupeizc 请问哪位高手知道成纤维细胞的生长周期啊,更确切的是血管外膜成纤维细胞生长周期,谢谢! zhujoker 估计都没人做过,你如果需要观察其生物学功能,就自己做一次,也算原创了啊! freecell 这里有: http://www.currentprotocols.com/protocol/cb0201 本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意
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