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Keep in dark place,Sealed in dry,Room Temperature
- 保质期:
2年
- 英文名:
(9,9-Dimethyl-9H-xanthene-4,5-diyl)bis(diphenylphosphine)
- 库存:
999
- 供应商:
北京康瑞纳生物科技有限公司
- CAS号:
161265-03-8
- 规格:
1g
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文献和实验mM magnesium acetate, 50 mM potassium acetate, 1 mM DTT (pH 7.9 at 25℃).双酶切连接反应的经验谈: 双酶切:1、在双酶切载体时如果2个酶切位点靠得很近,必须注意酶切顺序。因为有的限制性内切酶要求其识别序列的两端至少保留有若干个碱基才能保证酶的有效切割。有的酶要求识别序列两端有多个碱基的,则必须先切,否则就可能造成酶切失败。2、回收PCR产物:回收的PCR产物片段=1:10 ,一般取前者0.03pmol,后者取0.3pmol
1、 在双酶切载体时如果2个酶切位点靠得很近,必须注意酶切顺序。因为有的限制性内切酶要求其识别序列的两端至少保留有若干个碱基才能保证酶的有效切割。有的酶要求识别序列两端有多个碱基的,则必须先切,否则就可能造成酶切失败。 2、 回收PCR产物:回收的PCR产物片段=1:10 ,一般取前者0.03pmol,后者取0.3pmol。pmol为单位的DNA转换为为?g单位的DNA:(X
在进行PCR扩增时候,给引物两端设计好酶切位点,一般说来,限制酶的 选择非常重要,尽量选择粘端酶切和 那些酶切效率高的限制酶,如BamHI、HindIII,提前看好各公司的双切酶所用公用的BUFFER,以及各酶在公用BUFFER里的效率。选好酶切位点后,在各个酶的两边加上保护碱基,其原则可参照此处。双酶切时间及其体系:需要强调的是很多人建议酶切过夜,其实完全没有必要,我一般酶切3个小时,其实1个小时已经足够。应用大体系,如100微升。 纯化问题:纯化PCR产物割胶还是柱式,我推荐柱式
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