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- Boyao
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- 2025年07月08日
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文献和实验。 9. 最后，样品加入叠氮钠（终浓度0.5 g/L）及1.0 g/L BSA。将结合产物置4℃，避光保存，亦可加入50%重蒸甘油，置-20℃保存。 要点： 1. 如在反应混合液中有叠氮钠或游离氨基存在，会抑制标记反应。因此，蛋白质在反应前要对0.1 mol/L 碳酸氢钠缓冲液或0.5 mol/L 硼酸缓冲液 2. 所用的NHSB及待生物素化蛋白质之间的分子比按蛋白质表面的ε-氨基的密度会有所不同，选择不当则影响标记的效率，应先用几个不同的分子比来筛选最适条件。
1ml/管，蛋白质在1-3ml之间洗下； ９．最后，样品加入叠氮钠（终浓度0.5g/L）及1.0g/L BSA。将结合产物置4℃，避光保存，亦可加入50%重蒸甘油，置―20℃保存。 要点： １． 如在反应混合液中有叠氮钠或游离氨基存在，会抑制标记反应。因此，蛋白质在反应前要对0.1 mol/L碳酸氢钠缓冲液或0.5 mol/L硼酸缓冲液充分透析； ２． 所用的NHSB及待生物素化蛋白质之间的分子比按蛋白质表面的ε-氨基的密度会有所不同，选择不当则影响标记的效率，应先用几个
步骤 1. 在一支灭菌的Eppendof离心管中加入20μl探针DNA(0.5-1μg/μl，溶解于水中 2. 避光条件下加等体积的光敏生物素醋酸盐并混匀。 3. 将装有反应液的离心管置于冰模中，暗室中在光标记灯下照射30分钟（灯距样品15cm）。 4. 加入无菌水至总体积为100μl 5. 加入100μl仲丁醇，混匀。10000rpm离心10min，去上层液，再加入仲丁醇，离心，使水相浓缩至30
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