胶体金标记-小鼠抗乙肝e抗原

胶体金标记物的制备

胶体金标记蛋白质的原理，一般认为是由于pH值等于或稍偏碱于蛋白质等电点时，蛋白质呈电中性，此时蛋白质分子与胶体金颗粒相互间的静电作用较小，但蛋白质分子的表面张力却最大，处于一种微弱的水化状态，较易吸附于金颗粒的表面。由于蛋白质分子牢固地结合在金颗粒的表面，形成一个蛋白层，阻止了胶体金颗粒的相互接触，而使胶体金处于稳定状态，如果＝低于蛋白质的等电点时，蛋白质带正电荷，胶体金带负电荷，二者极易静电结合形成大的聚合物。如果pH高于蛋白质等电点时，蛋白质带负电荷，与金颗粒的负电荷相互排斥而不能互相

包埋前免疫纳米金单重染色

免疫纳米金染色与免疫胶体金―银法染色基本相似，也可分为包埋前染色和包埋后染色。下面分别介绍包埋前免疫纳米金单重染色和与免疫酶染色结合的双重染色基本程序： 包埋前免疫，纳米金单重染色按以下步骤进行免疫染色： 1. 含1％正常血清或1%BSA的PBS预孵育20～30分钟； 2. 特异性第一抗体4℃孵育24～48小时后PBS漂洗3次，每次10分钟； 3. 纳米金标记IgGFab，片段(1：100，Nanoprobes)室温孵育2小时或4℃孵育12小时后PBS漂洗3次，每次10

免疫金银染色双PAG法

免疫金银染色方法敏感、简便、省时、安全可靠，葡萄球菌A蛋白（SPA）金标记四步法是在此基础上发展起来的更为敏感的一种新方法。SPA和许多哺乳类动物IgG具有亲和性，且它们之间的连接不会干扰抗原——抗体的结合。简单的SPA金标记二步法后，第三步用抗SPA与SPA金表面分子通过Fab或Fc段相结合，结果结合更多的胶体金颗粒，再通过银增强，使原始信号得到几何级放大，其染色原理见图。双PAG免疫金银染色原理（一）染色流程：（1）石蜡切片常规脱蜡至水，0.05mol/L（pH7.4）TBS洗3×3min