HRP标记-小鼠抗山羊IgG

Western Blot实验准备与步骤

膜，转膜时间75min。转膜完成后丽春红染色试剂对膜进行染色，观察转膜效果。同时做好泳道标记，准备预实验时进行按照纵向泳道剪膜。3.6 封闭：将膜完全浸没封闭液（德元国际 Cat# LY7141）中室温轻摇60min。3.7 一抗孵育：用TBST稀释一抗，室温孵育10min，放4℃过夜。3.8 洗膜第二天从4度拿出膜，在室温孵育30min。洗膜：TBST洗膜5次，每次10min。3.9 二抗孵育：用5%脱脂奶粉-TBST稀释二抗，山羊抗兔IgG（H+L） HRP 山羊抗小鼠IgG（H+L

常用的免疫酶染色方法

PBST 漂洗，5min×3； *加HRP 标记的二抗室温孵育lh或37°C 30min ； *加0.01％H2O2~0.05％DAB显色 (显色液应新鲜配置)； *经PBS漂洗3次后，梯度酒精脱水，二甲苯透明，明胶甘油封片，显微镜观察。 （二）非标记抗体酶法 酶桥法 *首先用酶免疫动物，制备效价高、特异性强的抗酶抗体； *以二抗作桥，将抗酶抗体联结在一抗上； *再将酶结合在抗酶抗体上，经显色显示抗原的分布 -优点：任何抗体均未被酶标记。酶是通过免疫学原理与酶

组化染色背景高？没信号？一篇文章带你快速掌握免疫组化！

：使用 Anti-phospho-Akt (Ser473) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌组织进行免疫组织化学分析。（图 A）使用免疫组化试剂盒M&R HRP/DAB Detection IHC Kit，抗体 1:100 稀释；(图 B) 采用普通免疫组化试剂盒，抗体 1:25 稀释。 图 6 免疫组化实验检测 Erk1/2 表达 注：使用 Anti-Erk1/2 Mouse mAb与p44/42 MAPK （Erk1/2）Rabbit mAb 对正常小鼠心脏组织进行免疫