HRP标记-小鼠抗人IgG (Fab特异性)

HRP标记

问：有没有做辣根过氧化物标记的朋友啊，能不能把你们的步骤发给我。本人开始做，发现很多人用的浓度都不一样。答：1.1 试剂准备1) 10mg/mL HRP2) 0.06mol/L NaIO43) 0.16mol/L乙二醇4) 碳酸盐缓冲液(Na2CO3 0.7952g NaHCO3 1.4702g 溶于500mL蒸馏水中，调pH值到9.5)5) 2.5mg/mL NaBH46) 0.01mol/L磷酸盐缓冲液，pH7.41.2 操作步骤1. 10mg/mL取HRP VmL，溶液为棕黄色，加入

HRP标记抗体的方法

滴定：用特异性抗原(或抗体)同酶标记抗体(或抗免疫球蛋白抗体)作双向琼脂扩散试验或免疫电泳试验。然后用酶的底物使沉淀弧显色，可初步鉴定其活性。最后以直接ELISA法(或在正式实验系统里)对酶结合物进行滴定( 见本节 (三)工作浓度的选择)。（2）定量和克分子比值测定：可用分光光度计测定(光程1cm)。酶量(mg/ml)＝OD403nm×0.4IgG量(mg/ml)＝(OD280nm-OD403nm×0.42)×0.94×0.62 （3）本法标记步骤比较简单，重复性好。缺点是酶的利用率低

【转帖】HRP标记抗体的方法

酶与抗体交联的方法有许多种,根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备HRP结合物，可用戊二醛二步法和过碘酸钠法。尤以简易过碘酸钠法更为常用。 　　戊二醛二步法 　　1.　原理：戊二醛为一种双功能试剂，通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白结合物。 　　2.　标记步骤： 　　(1)　称取HRP25mg溶于1.25％戊二醛溶液中，于室温静置过夜。 　　(2)　反应后的酶溶液经Sephadex G-25层析柱，用生理盐水洗脱。流速控制