HRP标记-小鼠抗人IgM(μ链特异性)

HRP标记

问：有没有做辣根过氧化物标记的朋友啊，能不能把你们的步骤发给我。本人开始做，发现很多人用的浓度都不一样。答：1.1 试剂准备1) 10mg/mL HRP2) 0.06mol/L NaIO43) 0.16mol/L乙二醇4) 碳酸盐缓冲液(Na2CO3 0.7952g NaHCO3 1.4702g 溶于500mL蒸馏水中，调pH值到9.5)5) 2.5mg/mL NaBH46) 0.01mol/L磷酸盐缓冲液，pH7.41.2 操作步骤1. 10mg/mL取HRP VmL，溶液为棕黄色，加入

HRP标记抗体的方法

一、戊二醛二步法1. 原理戊二醛为一种双功能试剂，通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白结合物。2. 标记步骤（1）称取HRP25mg溶于1.25%戊二醛溶液中，于室温静置过夜。（2）反应后的酶溶液经Sephadex G-25层析柱，用生理盐水洗脱。流速控制在1ml/1分钟，收集棕色流出液。如体积大于5ml，则以PEG浓缩至5ml。放置25ml小烧杯中，缓慢搅拌。（3）将待标记的抗体12.5mg用生理盐水稀释至5ml，搅拌下逐滴加入酶溶液中。（4）用1M

μ法则 law of μ

S.A.Arrhenius （ 1889 ）提出的，即反应速与温度关系的法则。假设在绝对温度 T 的条件下，反应速度为 v ，则 v=Ae -μ /RT。式中 A 为频度因子， R 为气体常数，μ为活化能，亦称为温度特性或热增量（ thermal increment ）。若μ为一定，那么 log v 对 1/T 则表现为直线。在温度 T 1、 T 2时的反应速度分别为 v 1 、 v 2 ，则：μ =4.574 （ logv 2-log v 1） / （ 1/T 1 -1/T