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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
47
- 英文名:
Active Platelet Derived Growth Factor Subunit A (PDGFA)
- 供应商:
上海联祖
- 保存条件:
-20度
- 规格:
大鼠粒细胞集落刺激因子(GCSF)真核蛋白
IPTG浓度
有可能,宿主中的蛋白表达将通过lac操纵子系统操作。这个系统的详细解释可以在别处找到,你加入异丙基β-D-1-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG),一种乳糖类似物,控制蛋白的表达。蛋白的表达应处于生长的对数期,即当溶液的波长600(OD 600)处的光密度达到0.4-0.6。 如果你的目标是可溶性蛋白质,最好不要改变细胞中蛋白的折叠功能。已经假定不溶性蛋白可能是由于分子伴侣的存在。因此,使用高浓度的IPTG(> 1mM)可能不总是产生的结果。尝试几个不同的浓度,看看哪一个给你最高的可溶性蛋白的产量。
温度
偶尔,你可以在37°C的典型温度下,通过生长和诱导分离可溶性形式的蛋白质,但通常情况下,溶解度在较低温度下增强。可尝试在30°C,25°C和18°C下进行诱导。 注意:如果首先在37℃生长,先让培养物冷却到诱导温度,再加入IPTG。
诱导时间
更长并不总是更好。对于对宿主有毒的蛋白尤其如此。在诱导期间,每隔几个小时取样,并检查目的蛋白的表达。典型的诱导时间根据温度而变化:对于37℃,尝试4小时;对于30℃,进行5-6小时,并且任何低于25℃的温度应该允许生长过夜。
| 产品名称 | 小鼠血小板衍生生长因子A(PDGFA)活性蛋白 |
| 货号 | LZ-D7657 |
| 规格 | 10µg50µg 200µg 1mg 5mg |
| 物种 | Mus musculus (Mouse,小鼠) 。 |
英文别名:PDGF-A; PDGF1; Platelet Derived Growth Factor Alpha Polypeptide
物种:Mus musculus (Mouse,小鼠) 。
缓冲液成份:20mM Tris, 150mM NaCl缓冲液(pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300)
性状:冻干粉
纯度:> 97%
等电点:8.9
应用:Cell culture; Activity Assays
规格:10µg50µg 200µg 1mg 5mg
重组蛋白表达体系分析:
(一)原核表达系统
原核表达系统有大肠杆菌表达系统、芽孢杆菌表达系统、链霉菌表达系统。其中最常用的表达系统主要是大肠杆菌表达系统。卡梅德生物通过每年多达400个原核蛋白制备项目的技术积累拥有一套完整的蛋白表达和纯化方案,为客户提供优质服务。
(二)酵母表达系统
酵母是一种真核微生物,其细胞有表达外源蛋白的能力,可以达到一个相当高的胞密度状态,在酵母中表达外源蛋白可以进行翻译后修饰,如磷酸化和糖基化。由于酵母宿主细胞结合了细菌和高阶生物宿主细胞表达系统的优良特性,当外源蛋白未能成功地在大肠杆菌中表达时,它是一个不错的选择。用于外源蛋白表达的酵母菌株包括酿酒酵母、粟酒裂殖酵母、毕赤酵母和乳酸克鲁维酵母。卡梅德生物拥有丰富的酵母蛋白重组表达、发酵和纯化经验,能够快速为不同客户定制酵母表达策略。
(三)昆虫细胞表达系统
膜蛋白、大分子质量蛋白和蛋白激酶这些很难用细菌表达系统表达的蛋白,在Sf9或High-5等昆虫细胞中实现了表达。在大多数昆虫细胞表达系统中,外源基因通过杆状病毒载体转染宿主细胞,含有目标基因的标记盒通过同源重组并入宿主基因组中。卡梅德生物可以提供纯度高达95%的全长膜蛋白定制产品,免费对客户提供的基因进行序列分析,据Sf9,Sf21,Hi-5及S2昆虫细胞的密码子偏爱性,免费为您进行密码子优化,从而有效提高重组蛋白表达量。
(四)哺乳动物细胞表达系统
当含有复杂二硫键或翻译后修饰的靶蛋白不能使用其他表达系统表达时,哺乳动物细胞可表达外源蛋白。常用的外源蛋白表达的哺乳动物细胞系包括海拉(Hela)细胞、人胚肾细胞(HEK293)和中国仓鼠卵巢细胞(CHO)。卡梅德生物建立了完善的哺乳表达体系,包括但不限于FreeStyle 293-F cell line和Expi CHO-S等细胞系,配合卡梅德设计的高表达载体(含有全长的CMV启动子以及优化后的分泌信号肽序列),能够为客户提供更高表达水平的重组蛋白哺乳动物细胞表达与制备。
| 白介素-5受体α链抗体IL-5Rα Anti-IL5RA/CD125 WB IHC-P IHC-F IF | CD33重组食蟹猴 / 恒河猴 CD33 / Siglec-3 蛋白 (His 标签) Protein |
| 即刻早期应答基因5样蛋白抗体 Anti-IER5L WB IHC-P IHC-F IF | IASPP(inhibitory member of the ASPP family 0.5mgIASPP(inhibitory member of the ASPP family) 细胞凋亡ASPP家族的另一个成员(抗原) |
| 整合素αV抗体 Anti-CD51 WB IHC-P IHC-F IF | KLK4重组人 KLK-4 / Kallikrein-4 蛋白 (His 标签) Protein |
| 白细胞介素-19抗体 Anti-IL-19/NG.1 WB IHC-P IHC-F IF | CD300LG Protein Human 重组人 CLM-9 / TREM4 / CD300LG 蛋白 (Fc 标签) |
| 白介素3受体a链抗体 Anti-IL-3R alpha/CD123 WB IHC-P IHC-F IF | PTPN2 Protein Mouse 重组小鼠 PTPN2 / TC-PTP 蛋白 (aa 2-314, His 标签) |
| 富含脯氨酸同源蛋白1抗体 Anti-WAVE 1 WB IHC-P IHC-F IF | CLEC14A重组大鼠 CLEC14A / EGFR-5 蛋白 (Fc 标签) Protein |
| 端粒酶卡哈尔体蛋白抗体 Anti-TCAB1 WB IHC-P IHC-F IF | VDR Protein Human 重组人 VDR / NR1I1 蛋白 (His 标签) |
| 信号通路WNT10B抗体 Anti-WNT10B WB IHC-P IHC-F IF | CXCL1重组人 CXCL1 / MGSA / NAP-3 蛋白 (His & NusA 标签) Protein |
| EBV核蛋白2抗体 Anti-WAPL WB IHC-P IHC-F IF | VEGFC Protein Rat 重组大鼠 VEGFC / VEGF-C 蛋白 (aa 108-223, Fc 标签) |
| Wnt信号受体蛋白抗体 Anti-Wnt receptor WB IHC-P IHC-F IF | ACHE重组小鼠 Acetylcholinesterase / ACHE 蛋白 (His 标签) Protein |
| BIVM蛋白抗体 Anti-BIVM WB IHC-P IHC-F IF | S100钙结合蛋白A12(S100A12)重组蛋白 Recombinant S100 Calcium Binding Protein A12 (S100A12) |
| 乳腺癌易感基因复合物亚基蛋白3抗体 Anti-BRCC3 WB IHC-P IHC-F IF | CD1E & B2M Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CD1E & B2M Heterodimer 蛋白 |
| B淋巴细胞淋巴瘤因子9抗体 Anti-BCL9 WB IHC-P IHC-F IF | IL27 Protein Human 重组人 IL27 / Interleukin-27 蛋白 (His 标签) |
| 肿瘤转移抑制蛋白BAMBI抗体 Anti-BAMBI WB IHC-P IHC-F IF | 小鼠血小板衍生生长因子A(PDGFA)活性蛋白ERBB4重组人 / 恒河猴 HER4 / ErbB4 蛋白 (Fc 标签) Protein |
| 胆绿素还原酶抗体 Anti-Biliverdin Reductase WB IHC-P IHC-F IF | HIV gp120 艾滋病病毒(抗原 0.5mgHIV gp120 艾滋病病毒(抗原) |
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文献和实验/α亚族,主要趋化中性粒细胞,包括IL-8、黑素瘤细胞生长刺激活性(GRO/MGSA)、血小板因子-4(PF-4)、血小板碱性蛋白、蛋白水解来源的产物CTAP-III和β-thromboglobulin、炎症蛋白10(IP-10)、ENA-78;(2)C-C/β亚族,主要趋化单核细胞,包括巨噬细胞炎症蛋白1α(MIP-1α)、MIP-1β、RANTES、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1/MCAF)、MCP-2、MCP-3和I-309。 7.其它细胞因子,如表皮生长因子(EGF)、血小板衍生
持细胞生长。 在无血清培养基出现之前,血清被广泛用于细胞培养达几十年之久。动物血清主要包括胎牛血清、小牛血清、成牛血清、马血清、羊血清、鸡血清、兔血清等,其中以胎牛血清的使用最为普遍。动物血清在细胞培养中提供细胞增殖所需的生长因子、激素、转移蛋白、贴壁和铺展在培养基质上的因子、蛋白酶抑制剂和其他营养物质。使用血清的优点是血清含有促进细胞增殖和维持的大部分因子,它几乎是通用的生长添加物,适用于动物、人和昆虫细胞等的细胞培养。因而使用血清不需要为每一个细胞系优化培养基,节省
很多新手在问做原核表达需要考虑的载体和菌株的选择,现系统地解答一下,供新手借鉴。
。 控制基础表达水平 pET 系统提供 6 种载体 - 宿主菌组合,能够调节基础表达水平以优化目标基因的表达。没有单一策略或条件适用于所有目标蛋白,所以进行优化选择是必要的。 宿主菌株 质粒在非表达宿主菌中构建完成后,通常转化到一个带有 T7 RNA 聚合酶基因的宿主菌( λ DE3 溶原菌)中表达目标蛋白。在 λ DE3 溶原菌中, T7 RNA 聚合酶基因由 lacUV5 启动子控制。未诱导时便有一定程度转录,因此适合于表达其产物对宿主细胞生长无毒害作用的一些基因。而宿主菌带有
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