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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
上海联祖
- 库存:
25
- 克隆性:
单克隆
- 抗原来源:
单抗制备
- 抗体英文名:
Monoclonal Antibody to Netrin 4 (Ntn4)
- 抗体名:
人轴突生长诱向因子4(Ntn4)单克隆抗体
- 标记物:
无标记物
- 宿主:
小鼠
- 适应物种:
Homo sapiens (Human,人)
- 亚型:
IgG
- 应用范围:
科研实验
- 保存条件:
Shipped at 4℃. Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
- 浓度:
1mg/mL
- 规格:
20µl 100µl 200µl 1ml 10ml
产品名称:人轴突生长诱向因子4(Ntn4)单克隆抗体
英文名称:Monoclonal Antibody to Netrin 4 (Ntn4)
别名:Beta-Netrin; Hepar-derived netrin-like protein
细胞因子 肿瘤免疫 神经科学
物种 Homo sapiens (Human,人) 相同的名称,不同的物种。
| 货号 | 规格 | 产品名称 |
| LZ-KH0981 | 20µl 100µl 200µl 1ml 10ml | 人轴突生长诱向因子4(Ntn4)单克隆抗体 |
宿主 小鼠
效价(克隆号)-
Ig亚型 IgG
纯化方式 抗原特异性亲和纯化
标记物 无标记物
免疫原-
缓冲液成份 磷酸盐缓冲液(pH7.4,含有0.02% NaN3和50%甘油)
性状 液体
浓度 1mg/mL
且适物种 -
应用 WB; IHC; ICC; IP.
如果抗体需用于流式细胞术,请参见流式抗体。
特异性
该抗体是针对Ntn4的小鼠单克隆抗体。在免疫组织化学染色和免疫印迹实验中能识别Ntn4。
用法
免疫印迹:0.2-2μg/mL;1:500-5000
免疫组织化学:5-20μg/mL;1:50-200
免疫细胞化学:5-20μg/mL;1:50-200
稀释倍数最终由用户决定。
储存
经常使用则4°C保存。-20°C保存不超过两年。避免反复冻融。
规格:20µl 100µl 200µl 1ml 10ml
抗体分子标记技术:
(一)原理
当应用化学氧化法时(NaI)遇强氧化剂,离子被氧化为分子,所生成的自由分子可与某些基团进行卤化反应。蛋白质分子可进行卤化反应的基团主要为酪氨酸残基,某些组氨酸残基也可能进行化。在应用胺T( Chloramine T)法的实验中,所用的氧化剂(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)强挥发性的有机溶剂中。该溶剂加入试管后,先让其挥发(即让氧化剂将试管包被),然后把Na125I和蛋白质液加入包被好的试管中,反应完成即将混合液移入他管终止反应。
(二)准备
1.试剂
经亲和层析纯化的多克隆抗体或单克隆抗体;0.5mol/L磷酸钠缓冲液,pH7.5;无载体的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鲜制备的含2mg/m1络胺T的0.5mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.5);胺T反应终止缓冲液;
2.仪器
凝胶过滤柱;¥-记数器;玻璃纤维滤。
(三)操作要点
1.用胺T法进行化,也可在大约pH7.0的缓冲液中进行;
2.如果氧化反应损伤蛋白质,可将抗体与异硫酸荧光素(FITC)偶联)胺T量减少到0.02mg/m,并将偏重亚硫酸液的浓度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的试管可在干燥器中,于室温下保存多年;
4.1251标记的抗体,在制备后六周内均可使用(1251的半衰期为59.6天);
5.要注意保证所用的Na1251是新鲜的,陈旧制剂的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶尔会对抗原的抗体结合位点有干扰,因此降低其结合能力,但这种情况很少见。
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什么是多克隆抗体,单克隆抗体?
单克隆抗体:抗原上可以引起机体产生抗体的分子结构叫做抗原决定簇,也称为抗原表位。一个抗原可以有许多不同的抗原决定簇,因此,机体也可以产生多种不同的抗体。由单一 B 细胞克隆产生的高度均一、仅识别某一特定抗原表位的抗体。5年而不会影响效价,而真空干燥保存时间可以更久。保存前需经除菌并添加防腐剂。
多克隆抗体:由多个 B 淋巴细胞克隆产生的,受到多种抗原决定簇刺激 并可以与多种抗原表位结合的抗体。从某种角度而言,多克隆抗体是多种单抗的混合物。
制备单克隆抗体具体步骤:
一、免疫动物选择:
根据需要产生目标抗原的免疫反应,选择合适的免疫动物。例如,小鼠是最常用的免疫动物之一,因其易于操作且在免疫应答方面较为强大。
二、抗原免疫
将目标抗原注射到免疫动物体内,通常需要多次免疫以激发免疫反应。可以选择不同的免疫路线,如皮下、腹腔、静脉等。
三、细胞融合
从免疫动物获得脾细胞或淋巴细胞,与骨髓瘤细胞或其他癌细胞(如SP2/0、NS0等)融合,形成杂交瘤细胞。融合细胞通常使用聚乙烯醇(PEG)或电穿孔等方法促进细胞融合。
四、 杂交瘤细胞筛选
对融合细胞进行筛选,一般使用HAT选择性培养基,通过对非杂交瘤细胞和单克隆杂交瘤细胞的抗代选择,筛选出产生目标抗体的单克隆杂交瘤细胞。
五、单克隆抗体生产
从筛选出的单克隆杂交瘤细胞中获取单一细胞系,并进行大规模培养和产生抗体。一般可采用体外或体内方式生产单克隆抗体。
六、 抗体纯化
通过不同的方法对产生的单克隆抗体进行纯化,去除杂质,例如使用蛋白A/G层析、蛋白L层析、蛋白G层析等。
七、鉴定和验证
对纯化后的单克隆抗体进行鉴定和验证,例如使用酶联免疫吸附实验(ELISA)、免疫印迹(Western blotting)等方法,确定其免疫特异性和活性。
八、 应用
将制备好的单克隆抗体应用于具体的研究、诊断或治疗等领域,例如免疫组化、流式细胞术、免疫疫治疗等。
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文献和实验基和下游工艺的相关杂质,采用适当的技术和方法进行分析检测。 六、经修饰的单克隆抗体 为了提高单克隆抗体在治疗和体内诊断中的作用,常用单抗与毒素、药物、放射性核素或其它物质偶连形成免疫结合物,或在同一段多胎链包含非免疫球蛋白和免疫球蛋白序列的嵌合重组蛋白来获得。研究者除对前面提到的有关未偶连单克隆 抗体(未修饰单克隆 抗体)的要求外,还应提供下列内容: (一)免疫结合物的构建 应提供构建免疫结合物所用试剂和过程的详细资料,包括: 1、描述与单克隆抗体连接的成分如:毒素、药物、酶及细胞因子,包括
等。(4) 细胞工程药物研究与开发:生物活性多肽研究与开发,人参皂甙、紫杉醇等生物活 性成分研究与开发。(5) 单克隆抗体制备:包括诊断用单克隆抗体,治疗用单克隆抗体。基础研究(1) 药物作用机理(2) 基因功能(3) 疾病发生机理2、 生物制药(1) 疫苗生产:如病毒性疫苗(肝炎病毒疫苗、艾滋病疫苗等)、肿瘤疫苗(多肽疫苗)等。(2) 基因工程药物生产:如在临床医学中具有治疗价值的一些细胞生长因子如干扰素、 粒细胞生长因子、胸腺肽等(3) 诊断用和药用单克隆抗体生产(4) 细胞工程药物生产:生物
,这些生命现象和特有的功能均属于细胞的生物学特性,通过对不同细胞生物学特性的研究,我们又可以利用细胞的生物学特性来为医学服务,如利用细胞融合杂交技术,可以制备单克隆抗体来对临床疾病进行特异性诊断和治疗;利用细胞对病毒的敏感性,用于生产病毒疫苗和病毒抗原及抗体,既可用于疾病的预防,又可用于疾病的诊治;利用细胞的诱导分化可使癌细胞向正常细胞逆转,为癌症的彻底根治带来了希望;利用细胞的诱生和促诱生效应,可大量生产细胞因子药物和生化试剂等;利用细胞凋亡又可指导临床对肿瘤的化疗;利用细胞染色体及分区带特性
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