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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
上海联祖
- 库存:
59
- 克隆性:
多克隆
- 抗原来源:
多抗制备
- 抗体英文名:
Polyclonal Antibody to Interferon Gamma (IFNg)
- 抗体名:
兔干扰素γ(IFNg)多克隆抗体
- 标记物:
别藻蓝蛋白
- 宿主:
兔
- 适应物种:
Oryctolagus cuniculus (Rabbit,兔)
- 亚型:
IgG
- 应用范围:
科研实验
- 保存条件:
Shipped at 4℃. Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
- 浓度:
500μg/mL
- 规格:
20µl 100µl 200µl 1ml 10ml
产品名称:兔干扰素γ(IFNg)多克隆抗体
英文名称:Polyclonal Antibody to Interferon Gamma (IFNg)
别名:IFN-G; IFG; IFI; INFr; IFN, Immune Interferon
细胞因子 感染免疫
物种 Oryctolagus cuniculus (Rabbit,兔) 相同的名称,不同的物种。
| 货号 | 规格 | 产品名称 |
| LZ-KR0853 | 20µl 100µl 200µl 1ml 10ml | 兔干扰素γ(IFNg)多克隆抗体 |
宿主 豚鼠
效价 -
Ig类型 IgG
纯化方式 抗原特异性亲和纯化
标记物 别藻蓝蛋白
免疫原-
缓冲液成份 磷酸盐缓冲液(pH7.4,含有0.02% NaN3和50%甘油)
性状 液体
浓度 500μg/mL
且适物种 -
应用 WB; IHC; ICC; IP.
如果抗体需用于流式细胞术,请参见流式抗体。
特异性
该抗体是针对IFNg的豚鼠多克隆抗体。在免疫组织化学染色和免疫印迹实验中能识别IFNg。
用法
免疫印迹:0.2-2μg/mL;1:250-2500
免疫组织化学:5-20μg/mL;1:25-100
免疫细胞化学:5-20μg/mL;1:25-100
稀释倍数最终由用户决定。
储存
经常使用则4°C保存。-20°C保存不超过两年。避免反复冻融。
规格:20µl 100µl 200µl 1ml 10ml
抗体分子标记技术:
(一)原理
当应用化学氧化法时(NaI)遇强氧化剂,离子被氧化为分子,所生成的自由分子可与某些基团进行卤化反应。蛋白质分子可进行卤化反应的基团主要为酪氨酸残基,某些组氨酸残基也可能进行化。在应用胺T( Chloramine T)法的实验中,所用的氧化剂(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)强挥发性的有机溶剂中。该溶剂加入试管后,先让其挥发(即让氧化剂将试管包被),然后把Na125I和蛋白质液加入包被好的试管中,反应完成即将混合液移入他管终止反应。
(二)准备
1.试剂
经亲和层析纯化的多克隆抗体或单克隆抗体;0.5mol/L磷酸钠缓冲液,pH7.5;无载体的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鲜制备的含2mg/m1络胺T的0.5mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.5);胺T反应终止缓冲液;
2.仪器
凝胶过滤柱;¥-记数器;玻璃纤维滤。
(三)操作要点
1.用胺T法进行化,也可在大约pH7.0的缓冲液中进行;
2.如果氧化反应损伤蛋白质,可将抗体与异硫酸荧光素(FITC)偶联)胺T量减少到0.02mg/m,并将偏重亚硫酸液的浓度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的试管可在干燥器中,于室温下保存多年;
4.1251标记的抗体,在制备后六周内均可使用(1251的半衰期为59.6天);
5.要注意保证所用的Na1251是新鲜的,陈旧制剂的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶尔会对抗原的抗体结合位点有干扰,因此降低其结合能力,但这种情况很少见。
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什么是多克隆抗体,单克隆抗体?
单克隆抗体:抗原上可以引起机体产生抗体的分子结构叫做抗原决定簇,也称为抗原表位。一个抗原可以有许多不同的抗原决定簇,因此,机体也可以产生多种不同的抗体。由单一 B 细胞克隆产生的高度均一、仅识别某一特定抗原表位的抗体。5年而不会影响效价,而真空干燥保存时间可以更久。保存前需经除菌并添加防腐剂。
多克隆抗体:由多个 B 淋巴细胞克隆产生的,受到多种抗原决定簇刺激 并可以与多种抗原表位结合的抗体。从某种角度而言,多克隆抗体是多种单抗的混合物。
制备单克隆抗体具体步骤:
一、免疫动物选择:
根据需要产生目标抗原的免疫反应,选择合适的免疫动物。例如,小鼠是最常用的免疫动物之一,因其易于操作且在免疫应答方面较为强大。
二、抗原免疫
将目标抗原注射到免疫动物体内,通常需要多次免疫以激发免疫反应。可以选择不同的免疫路线,如皮下、腹腔、静脉等。
三、细胞融合
从免疫动物获得脾细胞或淋巴细胞,与骨髓瘤细胞或其他癌细胞(如SP2/0、NS0等)融合,形成杂交瘤细胞。融合细胞通常使用聚乙烯醇(PEG)或电穿孔等方法促进细胞融合。
四、 杂交瘤细胞筛选
对融合细胞进行筛选,一般使用HAT选择性培养基,通过对非杂交瘤细胞和单克隆杂交瘤细胞的抗代选择,筛选出产生目标抗体的单克隆杂交瘤细胞。
五、单克隆抗体生产
从筛选出的单克隆杂交瘤细胞中获取单一细胞系,并进行大规模培养和产生抗体。一般可采用体外或体内方式生产单克隆抗体。
六、 抗体纯化
通过不同的方法对产生的单克隆抗体进行纯化,去除杂质,例如使用蛋白A/G层析、蛋白L层析、蛋白G层析等。
七、鉴定和验证
对纯化后的单克隆抗体进行鉴定和验证,例如使用酶联免疫吸附实验(ELISA)、免疫印迹(Western blotting)等方法,确定其免疫特异性和活性。
八、 应用
将制备好的单克隆抗体应用于具体的研究、诊断或治疗等领域,例如免疫组化、流式细胞术、免疫疫治疗等。
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文献和实验【实验 目的 】 ⒈ 加深对抗体基本知识的了解。 ⒉ 了解多克隆抗体的制备及纯化的基本方法。 ⒊ 了解免疫电泳的基本过程和实验依据。 一、多克隆抗体的制备 【实验 原理 】 当将抗原注射入实验动物体内时,一系列抗体生成细胞会不同程度的与抗原结合,受抗原刺激后在血液中产生不同类型的抗体,这种由一种抗原刺激产生的抗体称为多克隆抗体。多克隆抗体
2ml(获得0.5-1ml免疫前血清)完全弗氏佐剂(CFA)混合的200μg抗原免疫兔。第2星期完全弗氏佐剂(CFA)混合的200μg抗原免疫兔。第4星期不完全弗氏佐剂(IFA)混合的100μg抗原免疫兔。第5星期取检测血清20-30ml取适当的细胞或组织进行ELISA和WB检测,溶解在生理盐水中的100μg抗原免疫兔。第6星期如果检测阳性第一次采血20-30ml,溶解在生理盐水中的100μg抗原免疫兔;如果上次检测是阴性,取适当的细胞或组织进行ELISA和WB检测。第7星期第二次采血20-30
。在三次免疫后,可以获得较高效价的抗体,每次取血量可以在40ml,不要取太多,否则会造成兔子贫血。最后一次取血可以采用颈动脉放血,具体操作如下: 1、家兔仰卧于兔架上固定头部,用纱布固定四肢。头部略放低以暴露颈部。剃毛并消毒皮肤 2、沿颈部中线用手术刀切开皮肤约10cm,分离皮下结缔组织,直至暴露出气管两侧的胸锁乳突肌(小心操作,如碰到小血管出血,可用止血钳止血) 3、用直头止血钳分离胸锁乳突肌与气管间的颈三角区疏松组织,暴露出颈总动脉后用弯头眼科镊使之游离,剥离神经和结缔组织 4、于动脉
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