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文献和实验P.S 100μg/ml。(注:P.S不能冻融多次,应少量分装,一次用完)。④NaHCO3液,用于调整pH值,常用浓度为5~6%,配制用三蒸水溶解后过滤除菌或高压灭菌,分装4℃保存。⑤胰蛋白酶在pH 8.0,温度37℃时作用力最强(详见配方)。⑥EDTA液(详见配方)。附:胰酶消化液配方(500ml)NaCl 4gKCl(19%)1 mlNa2HPO4 0.126g(12H2O)Tris1.5g(三羟甲基氨基甲烷)以上药物充分溶解后加水至500 ml,然后再加胰蛋白酶5g,最后用1N HCL调
。这里介绍经典的盐桥法(又称为毛细管法)。(一)试剂准备1.变性液:0.5 M NaOH;1.5 M NaCl。2.中和液:1 M Tris-HCl(pH7.4);1.5 M NaCl;3.转移液(20× SSC): NaCl 175.3 g;柠檬酸三钠 82.2 g,NaOH 调 pH 至 7.0,加 ddH2O 至 1000 mL。(二)操作步骤1. 碱变性: 室温下将凝胶浸入数倍体积的变性液中 30 min。2. 中和: 将凝胶转移到中和液 15 min。3. 转移 按凝胶的大小剪裁 NC
。 4×样品缓冲液:1.5MTris-HCl(pH 6.8)166 ul,20% SDS 400 ul,400 ul 甘油,0.062g二硫苏糖醇,0.005 g溴酚蓝,定容至1 ml,-20℃备用。 1×磷酸盐缓冲液(PBS):8 g NaCl,0.2 g KCl,1.44 g Na2HPO4,0.24 g KH2PO4,加800 ml三蒸水,振 荡混匀后,用饱和盐酸调pH至7.8,定容至1000 ml。 10%过硫酸胺:0.2g溶于2ml三蒸水中,隔一周配一次,避光4℃放置
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