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文献和实验内的,而酶只有在甘油浓度 具体操作如下:在 1.5 mL 离心管中依次加入DNA(1 μg/μl)20 μg10× 酶切 buffer 4.0 μl限制性内切酶(10 U/μl)5.0 μl加 ddH2O 至 500 μl在最适温度下消化 1-3 hr。消化结束时可取 5 μl 电泳检测消化效果。如果消化效果不好,可以延长消化时间,但超过 6 hr 已没有必要。或者放大反应体积,或者补充酶再消化。如仍不能奏效,可能的原因是 DNA 样品中有太多的杂质,或酶的活力下降。消化后的 DNA 加入 1/10
质芯片检测。此外,肽芯片或基于质谱的方法[ 20,21] 也可以用于这方面。 我们在此介绍基于蛋白质芯片技术的蛋白磷酸化筛选方法和高通量确定蛋白激酶底物的方法。我们已成功地用这种筛选工具鉴定大麦酪蛋白激酶 2α ( CK 2α) 和不同的拟南芥丝裂原活化蛋白(MAP) 激酶 [23] 的新靶标。我们这个方法使用本书第 28 章详细描述的植物蛋白质芯片(见第 28 章)。在放射性【 γ33 磷】三磷酸腺苷存在的条件下,用可溶和具有活性的激酶孵育芯片。通过磷屏成像仪或 X 射线胶片检测到的放射性信号,对可能
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