人源scFV抗体库构建服务

Single-chain Fv（scFv）抗体文库是指将抗体的可变区（VH和VL）基因，尤其是CDR区域（互补决定区）采用不同的策略和方式，如氨基酸突变，移码读框等形成数目庞大的不同克隆，并从这些克隆中筛选出针对目的抗原的高亲和力单链Fv抗体。研究表明，抗体可变区的CDR3的多样性直接决定了抗原特异性和结合亲和力，并且CDR3-FR（frame region）组合的多样性决定了抗体经历何种方式的亲和成熟过程。
我们采用错误倾向性PCR，巢式PCR等技术构建达到10⁸-10⁹CFU库容量的一级文库。相比Fab 抗体文库，由于scFv抗体分子量更小，约25kDa，scFV抗体更加稳定，也不容易形成多聚体。

噬菌体宿主体系：

卡梅德生物科技噬菌体展示平台拥有M13，T4和T7噬菌体系列，根据客户的项目需求（展示的蛋白或抗体片段的大小等参数），我们会采用不同的噬菌体系列进行文库构建。在我们完成的案例中，基于M13噬菌体pIII基因展示体系较为常用，构建的库容量可以达到10¹¹，其中有效库容量为10⁹。
同时，客户也可以提供抗原，我们进行体外外周血淋巴单核细胞敏化，从而获得更高亲和力和特异性的单克隆抗体，通常基于该方法制备的抗体亲和力能达到10^-13 M级别。

项目流程：
 

步骤	服务内容	周期
抗体cDNA制备	1. 总RNA提取 2. 高保真RT-PCR制备cDNA 3. 系统对照：Actin特异引物PCR扩增，以鉴定逆转录产品cDNA质量	8-9周
构建抗体库	1. 引物设计与合成：抗体可变区兼并引物设计、合成 2. 以cDNA为模板，PCR扩增抗体重链和轻链可变区基因 3. scFv基因拼接 4. 噬粒构建与转化：酶切、连接scFv和噬菌粒载体，电击转化TG1宿主菌，构建抗体库 5. 鉴定：随机挑选20-50个克隆，PCR鉴定阳性率，测序和分析抗体序列 6. 包装，＞1x1013噬菌体颗粒/ml
交付	*构建报告，包括详细建程序，代表性序列信息。 *产品交付：细菌和噬菌体两种形式抗体库。

我们的服务优势：
 
--免疫，天然和合成抗体噬菌体文库构建；
--周期短：预制抗体文库筛选服务；
--严谨完整的QC标准；
--高库容量：独立克隆数10⁷-10¹²；
--高通量筛选与灵活，个性化的文库淘筛策略；
--高亲和力抗体制备：10^-7-10^-13；
--多种噬菌体展示系统：M13，T4，T7；
--完整的上下游服务：提供从抗体制备、抗体测序，抗体标记修饰，到抗体人源化等一站式技术服务，节约客户宝贵时间和经费；
--服务可定制：根据客户需求制备，为每一个客户量身定制实验方案，满足每一位客户的特殊需求

技术流程：



公司介绍：

卡梅德生物科技（天津）有限公司作为国家高新技术企业，专注于为全球科学家和研究机构提供天然蛋白提取与发酵、重组蛋白定制表达服务，单、多克隆抗体开发，噬菌体文库构建与筛选服务；同时，基于我公司成熟的五大核心技术服务平台，成功研发了众多用于科学研究的重组蛋白、抗体、抗体药物靶点蛋白、工业酶、诊断原料等相关试剂。

核心平台：

---噬菌体抗体展示技术平台

卡梅德生物科技有限公司利用自有的噬菌体（M13，T7噬菌体）展示技术平台，能够为客户提供高性价比的重组VHH抗体（纳米抗体/驼类纳米抗体）制备方案，包括动物免疫，文库建立，文库筛选以及重组抗体的体外表达等。



---抗体工程技术平台

卡梅德生物科技的抗体工程平台包含单克隆抗体制备服务平台，多克隆抗体制备服务平台，抗体测序与改造平台。 单克隆抗体制备平台：基于杂交瘤技术的小鼠单抗技术平台，能够在2-3个月获得高亲和力与高特异性的单克隆抗体，同时基于噬菌体展示技术，我司能够制备多物种的重组单克隆抗体，包括小鼠，兔子，骆驼，羊驼以及人单抗。

多克隆抗体制备服务平台：能够为客户提供兔多抗，羊多抗，骆驼类多抗，牛多抗等多物种的抗体制备服务，根据不同的抗原类型，来自卡梅德生物的抗体专家会为您量身定做适合您需求的方案，以满足您的项目要求并节省您的宝贵时间。

抗体一级序列测序平台：为满足大量客户对抗体基因序列与氨基酸序列信息的需求，我们为客户提供De Novo抗体全长氨基酸序列解析和N端测序服务；同时我们设计积累多达80种杂交瘤抗体基因测序引物。

抗体改造技术平台：卡梅德生物技术的抗体改造平台包括嵌合抗体制备，抗体亲和力成熟以及抗体人源化服务。目前我们已经成功制备十几例嵌合抗体与人源化抗体，均成功交付。



---蛋白表达与纯化服务技术平台

卡梅德生物科技目前拥有四大蛋白表达平台，能为客户提供优质的蛋白表达技术服务。

哺乳动物表达平台： 目前公司拥有Freestyle CHO，Expi CHO，CHO-DG44，HEK293F，Vero等细胞系用于蛋白表达制备。公司秉承质量优先原则，全部统一采用Gibco细胞培养基和相关转染配套试剂，以保证每个批次的哺乳动物细胞蛋白表达产品高质量、高表达水平的交付。同时公司拥有的表达载体体系，相比市面常用蛋白表达载体，能够为客户提供更高纯度的蛋白。

昆虫细胞表达平台：目前公司常采用的昆虫表达细胞为SF9，配套使用的是来自Gibco的培养基，只为更快、更好地为客户提供高质量的产品。利用该蛋白表达平台，我们已经成功制备了多种人源跨膜蛋白，包括多种GPCR家族成员蛋白。

原核蛋白表达平台：大肠杆菌（E.coli）重组蛋白表达技术经过多年的发展，已经积累了很多的经验。但如果要在大肠杆菌表达体系获得不错的可溶以及高产量的蛋白表达，一个全方位设计的表达策略必不可少。卡梅德生物科技的专家团队在蛋白表达和抗体制备方面具有丰富的经验和知识储备，针对每位客户的需求，我们的都会提供具体的方案设计。

酵母蛋白表达平台：毕赤酵母，酿酒酵母等蛋白表达体系，适用于需要真核表达蛋白，同时兼具产量与性价比的项目需求特点。

植物表达平台：为了提供更好的服务，卡梅德生物携手国内重点科研单位共同为客户提供基因烟草瞬时转染技术的植物蛋白表达服务，项目从设计构建到蛋白表达只需要4-6周。该技术平台能够为客户在较短的时间内获得高纯度，高质量的植物来源的蛋白，已解决大部分植物蛋白在上述几大蛋白表达系统中不溶或不表达的难题。

---蛋白批量发酵平台

超高密度发酵技术：卡梅德生物科技能够为客户提供5L，10L,30L，80L体积的贴壁细胞高密度发酵技术服务（微载体贴壁培养技术），人源细胞贴壁细胞培养密度高达4x106个/ml，适用于病毒转染类型的蛋白高产量表达发酵，能够做到1g/L发酵水平。利用该技术平台，我们目前完成的重组抗体发酵表达记录高达4.7g/L发酵水平。

同时，借助有氧发酵技术，我们能够为客户提供原核和酵母的超高密度发酵服务，采用有氧发酵类型的原核发酵技术，蛋白产量比传统的原核发酵要高（相差接近100倍蛋白产量和得率）。

---蛋白纯化技术平台：

我司分别配制了Akta和BioRad Biological的蛋白纯化仪，同时拥有GE全套填料，包括Sphedax 75/200,500, G25,G100，CMFF,Q-FF，DEAE以及不同规格的预装柱等，能够在1-2周内为客户完成一套蛋白纯化的工艺开发小试方案。我司的科研团队成员均来自国内生物制药企业，硕士博士学历占比98%，因此有能力为客户提供快速，高质量天然蛋白和跨膜蛋白的纯化等优质服务。



---稳定细胞系筛选平台与基础分子生物平台

稳定细胞系构建平台：卡梅德生物可为客户定制不同类型的稳定细胞系构建与筛选服务，如利用Crisper/Cas9的多物种、多细胞系来源的细胞沉默，敲除，过表达等稳定细胞系；同时我们也为客户提供基于电转或脂质体转染（Lipofectin2000/3000）的稳定转染细胞系构建服务，如CHO细胞蛋白高表达细胞株等。

卡梅德生物的基础分子生物学平台承担了包括基因克隆，蛋白定量，免疫印迹检测（SDS-PAGE、WB），宿主核酸检测，蛋白抗体亲和纯化，ELISA操作，内毒素检测，HPLC分析，免疫组化，IP，免疫浊度，流式细胞术等服务。