5mL冻存管管身

类器官培养与应用——血管类器官

- - Matrigel - - - - 20％ - -   hPSCs培养 1、将冻存的 Matrigel 在 4℃ 下过夜解冻，在 6 孔板的每孔滴加 1ml 冷的 Matrigel，旋动 6 孔板使 Matrigel 分布均匀。随后转移至 37℃ 条件下孵育 10min 使其凝固，使用前需室温静置 1h。 2、将 hPSCs 接种在包被 Matrigel 的 6 孔板中，每孔加入 3ml E8 培养基，放置在 37℃，5%CO2 的培养箱中，培养至细胞汇合度约为 75–85

人外周血PBMC的制备及注意事项

mL离心管，且离心管使用量不要超过三分之一，可以将血样进行等分后加入多个离心管。 分选后的细胞样本直接诱导阻断进行细胞因子的检测，效果最佳，分选后的样本也可冻存，需要的时候再诱导检测。 诱导阻断后来不及检测的样本，最好冻存，并在 3 天内检测效果最好。冻存液推荐使用 90% 的FBS+10% 的 DMSO。冻存 24h 再检测，结果无大的影响；冻存 3 天再检测，CD3 和 IFN-γ 表达略有降低；冻存1周后再复苏检测，CD3和IFN-γ表达较大幅度降低。 Ficoll 分离液分离后图片：

做细胞冻存的人都经历过这些致命败笔！你逃过了吗？

在园子里经常看到询问冻存、复苏细胞的方法和注意事项。故介绍一些致命的 “败笔”，和解决方法。 希望对大家有帮助。 （ 以 Raji 为例） 一、细胞冻存： 1. 错误的时机： 细胞状态不好（长的太过了，培养液已经很黄；细胞可疑污染；细胞已 经开始凋亡或崩解；连续培养超过二个月，细胞性状已有改变改变）。 解决： 最佳时机：细胞增殖旺盛，情况稳定，试验效果良好，复苏后两周内。 2. 细胞太少： 冻存时细胞浓度低于 1-5×1000,000/ml。（复苏很难成功）。 解决： 离心后调整细胞