猪生殖与呼吸综合症病毒美洲型经典株RT-PCR试剂盒

猪生殖与呼吸综合症病毒美洲型经典株RT-PCR试剂盒
产品及特点： 
1. 一站式，用户不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。
2. 根据猪生殖与呼吸综合症病毒美洲型经典株的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。
3. 灵敏度可以达到1000拷贝/反应。
4. 使用一管式 RT-PCR 技术，RT 和 PCR 两步在一个试管内完成，不需要中间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。
5. 本产品足够50次20μL体系的RT-PCR。
6. 本产品由酶联生物提供，不得用于临床诊断。

规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	5×双酶一管式 RT-PCR Buffer	200 μL（橘黄盖）
试剂二	MMLV-Taq Mix	75 μL（红盖)
试剂三	超纯水	1 mL（亮黄盖）
试剂四	猪生殖与呼吸综合症病毒美洲型经典株RT-PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂五	猪生殖与呼吸综合症病毒美洲型经典株RT-PCR阳性对照（1×10E8 /μL）	50 μL（黄盖）
试剂六	使用手册	1 份

注：为避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供专一的DNA 片段作为阳性对照。 
运输及保存： 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。
自备试剂： 样品 RNA。
猪生殖与呼吸综合症病毒美洲型经典株RT-PCR试剂盒
使用方法：  
一、样品 RNA 的制备： 
1.  如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL猪生殖与呼吸综合症病毒美洲型经典株PCR阳性对照的 1000 倍稀释液作为制备的阳性对照。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。
2. 用自选方法纯化N+2个样品的RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。可以选购本公司的柱式病毒RNAout。
二、设置 RT-PCR 反应（20μL 体系）：  
3. 如果有N+2个样品，则标记N+4个PCR管（额外增加的两个管一个是RT-PCR阳
性对照，另一个是RT-PCR 阴性对照）并按照下表在PCR管中加入下列成分：

成份	N+2 个 样品管	RT-PCR 阴性对照	RT-PCR 阳性对照
5×双酶一管式RT-PCR Buffer	各 4 μL	4 μL	4 μL
猪生殖与呼吸综合症病毒美洲型经典株RT-PCR引物混合液	各 2 μL	2μL	2μL
N+2个制备的 RNA 样品	各 12.5μL	--	--
超纯水	--	12.5μL	--
猪生殖与呼吸综合症病毒美洲型经典株RT-PCR阳性对照的1000倍稀释液	--	--	12.5μL
MMLV-Taq Mix	1.5 μL	1.5 μL	1.5 μL

4. 上机进行 RT-PCR，RT-PCR 反应参数为:

过程	温度	时间
逆转录	42℃	30 min
预变性	95℃	5 min
PCR反应(35个循环）	95℃	30 sec
	58℃	30 sec
	72℃	20 sec
延伸	72℃	7 min

三、电泳检测： 
5. 琼脂糖电泳检测扩增效果。如果阴性对照有扩增产物或阳性对照无扩增产物，则说明实验失败，需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有扩增产物、阳性对照必须有预期条带出现，才有必要分析样品的实验结果，如果有预期片段大小的扩增产物则为阳性，如果无则为阴性。