- ￥4490
- gelatins
- 国内
- JLC-G10904
- 2025年11月11日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
避光/低温保存
- 保质期：
12个月
- 英文名：
高致病猪生殖与呼吸综合症病毒美洲型变异株探针法荧光定量RT-PCR试剂盒
- 库存：
大量
- 供应商：
江西江蓝纯生物试剂有限公司
- 规格：
50次
产品及特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品 RNA 模板。
2. 引物和探针经过优化，灵敏性高。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. 特异性高，引物是根据高致病猪生殖与呼吸综合症病毒美洲型变异株高度保守区设计，不会跟其他病毒的RNA发生交叉反应。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 RT-PCR 反应。
6. 本产品由江蓝纯生物提供，不得用于临床诊断。
规格及成分：
| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 | 探针法 qRT-PCR 缓冲液 | 500 μL（蓝盖） |
| 试剂二 | 探针法 qRT-PCR 酶混合液 | 100 μL（红盖） |
| 试剂三 | 荧光 PCR 专用模板稀释液 | 1 mL（黄盖） |
| 试剂四 | 高致病猪生殖与呼吸综合症病毒美洲型变异株探针法qRT-PCR引物混合液 | 100 μL（白盖） |
| 试剂五 | 高致病猪生殖与呼吸综合症病毒美洲型变异株 qRT-PCR 探针 | 50 μL（棕色管） |
| 试剂六 | 高致病猪生殖与呼吸综合症病毒美洲型变异株探针法qRT-PCR阳性对照(1×10E8 /μL) | 50 μL（黄盖） |
| 使用手册 | 1 份 | |
低温运输、-20℃保存，有效期一年。
自备试剂：
样品 RNA。
高致病猪生殖与呼吸综合症病毒美洲型变异株探针法荧光定量RT-PCR试剂盒
使用方法：
一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）：
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 RT-PCR 专用模板稀释液，用带芯枪头，下同）。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 RNA 的制备：
7. 如果有 N 个样品，设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的 10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为 NC。
8. 用自选方法纯化样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的柱式病毒 RNAout。
三、Probe qRT-PCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）：
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于 PCR 阳性对照（用第 4 号管的阳性对照稀释液做模板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
10. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后加）：
| 成份 | 样品管N+2个 | RT-PCR阴性对照管 | 标准曲线样品管 (2-7管) |
| 探针法 qRT-PCR 缓冲液 | 各 10 μL | 10 μL | 各 10 μL |
| 探针法 qRT-PCR 酶混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
| 高致病猪生殖与呼吸综合症病毒美洲型变异株 qRT-PCR 探针 | 各 1 μL | 1 μL | 各 1 μL |
| 高致病猪生殖与呼吸综合症病毒美洲型变异株探针qRT-PCR引物混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
| 待测样品 RNA 模板 | 各 5 μL | -- | -- |
| 超纯水 | -- | 5 μL | -- |
| 第7步所得标准曲线样品稀释液2-7号 | 不加 | 不加 | 各5 μL (2号样到2号管，3号样到3号管) |
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 逆转录 | 50℃ | 30 min |
| 预变性 | 94℃ | 10 min |
| qRT-PCR反应35个循环 | 94℃ | 15 sec |
| 60℃ | 1 min，(采集FAM通道的荧光信号) |
12. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品RNA 浓度的 log 值，再推算出其浓度。
13. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于或等于 30。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性，如果小于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间，则重复一次。重复实验的 Ct值如果大于或等于 40 则为阴性，如果小于 40，则为阳性。
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文献和实验在 1 个小时内就可得出是否感染禽流感病毒的初步结论，从而为疫情的控制和相关应急措施的实施赢得极其宝贵的时间。 目前世界上已有的流感快速诊断试剂盒仅能鉴别出型，即有型的特异性，但无法鉴别出亚型，对于型内高致病性、低致病性和无致病性亚型却缺乏基本的识别能力。采用传统病原学检测方法 —— 鸡胚病毒培养法检测禽流感病毒需要数天时间，琼脂凝胶免疫扩散试验 (AGID) 需要 3 ～ 5 天，最快的 RT － PCR 也需要 4 小时以上，检测时间过长。 以 RT － PCR 法检测需要
或欧洲鸡瘟。按病原体类型的不同，禽流感可分为高致病性、低致病性和非致病性禽流感三大类。非致病性禽流感不会引起明显症状，仅使染病的禽鸟体内产生病毒抗体。低致病性禽流感可使禽类出现轻度呼吸道症状，食量减少，产蛋量下降，出现零星死亡。高致病性禽流感最为严重，发病率和死亡率均高，感染的鸡群常常“全军覆没”。 目录 • 基本概念 • 疫情 • 疫苗研究 • 药物研究 基本
病、军团杆菌、登革热病毒和骨质疏松标志物等等项目。 3． 国际市场中的检测项目多样化，且规格多样化人性化 如Determine的 HIV试剂针对了高度变异的O群；Cholestech LDX系列的基于干化学方法的脂类标志物，其检测卡有TC.HDL.GLU、TC.GLU多种组合，Triage的呼吸短促盘，联合快速诊断肌酸激酶、肌红蛋白；这些多样化、人性化的组合，使得全面、快速、准确的诊断得以实现。
